Question

3．某質(zhì)粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三種限制酶切割位點，同時還含有抗四環(huán)素基因和抗氨芐青霉素基因．利用此質(zhì)粒獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草的過程如圖所示，請回答下列問題．

（1）抗鹽某因是否在煙草細胞中穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵是抗鹽基因（目的基因）是否插入到煙草的染色體DNA上．
（2）在構(gòu)建重組質(zhì)粒時，應(yīng)選用HindⅢ和SalⅠ兩種酶對目的基因和質(zhì)粒進行切割，以保證重組DNA序列的唯一性．
（3）將目的基因?qū)�入植物細胞采用最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．含有目的基因的農(nóng)桿菌可根據(jù)標記基因進行篩選．若農(nóng)桿菌在含有氨芐青霉素和四環(huán)素的培養(yǎng)基上都可以生長繁殖，農(nóng)桿菌中是否己含有目的基因？否（是/否）．為什么？含有目的基因的質(zhì)粒抗四環(huán)素的基因被破壞．
（4）愈傷組織經(jīng)再分化形成完整植株，這一過程需要再轉(zhuǎn)接到分化培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，該過程的實質(zhì)是基因的選擇性表達．

Answer 1

分析 分析題圖：圖示表示轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草的培育過程，包括獲取目的基因、基因表達載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)�入受體細胞、目的基因的檢測和鑒定，最后還需要采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)將轉(zhuǎn)基因植物細胞培育成轉(zhuǎn)基因植株．

解答 解：（1）抗鹽某因是否在煙草細胞中穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵是抗鹽基因（目的基因）是否插入到煙草的染色體DNA上．
（2）質(zhì)粒和含有目的基因的外源DNA分子上都含有SalI、Hindm、BamHI三種限制酶切割位點，其中BamHI的切割位點位于目的基因上，用該酶切割會破壞目的基因；若只用SalI一種限制酶切割可能會導(dǎo)致目的基因與運載體反向連接；因此在構(gòu)建重組質(zhì)粒時，應(yīng)選用SalI和HindIII兩種限制酶對質(zhì)粒和含有抗鹽基因的DNA進行切割，以保證重組DNA序列的唯一性．
（3）構(gòu)建基因表達載體時，抗四環(huán)素基因被破壞，但抗氨芐青霉素的基因沒有被破壞，因此含有重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上不能生存，但在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上能生存．
（4）植物組織培養(yǎng)包括脫分化和再分化兩個階段，脫分化形成的愈傷組織需經(jīng)再分化形成完整植株，這一過程需要再轉(zhuǎn)接到分化培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)；細胞分化的實質(zhì)是基因的選擇性表達．
故答案為：
（1）抗鹽基因（目的基因）是否插入到煙草的染色體DNA上
（2）HindⅢSalⅠ
（3）否   含有目的基因的質(zhì)�？顾沫h(huán)素的基因被破壞
（4）再分化    分化   基因的選擇性表達

點評 本題結(jié)合轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草的培育過程圖，考查基因工程、植物組織培養(yǎng)等知識，要求考生識記基因工程的原理、工具及操作步驟，能根據(jù)圖中限制酶的位置及題干要求選擇正確的限制酶；能根據(jù)題中信息判斷培養(yǎng)基中抗生素的名稱；識記植物組織培養(yǎng)過程及條件．