小鼠基因敲除技術(shù)2007年獲諾貝爾獎。80年代初胚胎干細(xì)胞的分離和體外培養(yǎng)的成功奠定了基因敲除的技術(shù)基礎(chǔ)，87年Thompsson首次建立了完整的ESC基因敲除技術(shù)的模型，此后幾年中基因敲除技術(shù)得到了進(jìn)一步的發(fā)展和完善，其技術(shù)路線如下。

①胚胎干細(xì)胞的獲得；

②構(gòu)建重組基因表達(dá)載體；

③用一定方法把重組DNA轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞內(nèi)；

④用一定培養(yǎng)基篩選已擊中的細(xì)胞；

⑤將擊中的細(xì)胞轉(zhuǎn)入胚胎，通過胚胎移植使其生長為轉(zhuǎn)基因動物，然后對該動物進(jìn)行形態(tài)觀察和分子生物學(xué)檢測。

異源抗體用于人體容易發(fā)生排異反應(yīng)，若將動物抗體分子基因敲除，代之以人的抗體分子基因，那么人源抗體的產(chǎn)生將迎刃而解。根據(jù)上述材料回答下列問題：

（1）構(gòu)建重組載體過程中，為使導(dǎo)人的目的基因能完成表達(dá)，需要在目的基因的首端和尾端各插入               ；

（2）上述過程中所需的胚胎通常通過供體獲得，再將處理過的胚胎移植到受體內(nèi)培養(yǎng)，則胚胎移植前要對供體和受體進(jìn)行               處理，若想培養(yǎng)出多個性狀表現(xiàn)一致的個體，可通過               技術(shù)；

（3）應(yīng)用基因敲除技術(shù)可讓動物生產(chǎn)人源抗體，通�？蓪膭游矬w內(nèi)提取的細(xì)胞的抗體分子基因敲除，代之以人的抗體分子基因，然后將該細(xì)胞通過細(xì)胞融合技術(shù)與骨髓瘤細(xì)胞融合，再通過               、               等過程篩選出能產(chǎn)生人源抗體的細(xì)胞群，再在培養(yǎng)液或小鼠腹腔進(jìn)行培養(yǎng)，從而獲得所需抗體；

（4）用培養(yǎng)基篩選重組載體是否已擊中細(xì)胞，方法之一是啟動子缺失篩選法：原理是在重組載體的目的片段中插入一個啟動子缺失的正向選擇基因，同時目的基因片段也不包含該基因的啟動子序列。若基因載體和細(xì)胞基因組發(fā)生同源重組，則正向選擇基因可以在靶位點基因啟動子的作用下得以表達(dá)，使陽性細(xì)胞具有G418抗性（G418是一種細(xì)胞毒性藥物，對細(xì)胞有抑制或殺傷作用），從而從培養(yǎng)基中得到所需要的陽性克隆細(xì)胞，根據(jù)上述原理篩選導(dǎo)入成功的細(xì)胞的基本方法或過程是               。

（1）啟動子和終止子（兩者都填才給分）

（2）同期發(fā)情處理   胚胎分割移植  

（3）特定的選擇培養(yǎng)基、（動物細(xì)胞培養(yǎng)）  抗體陽性檢測  

（4）在培養(yǎng)基中加入G418（1分），然后培養(yǎng)處理過的細(xì)胞，能正常生長并增殖的細(xì)胞（1分）便是擊中的細(xì)胞

練習(xí)冊系列答案
相關(guān)習(xí)題

科目：高中生物 來源： 題型：

（16分）小鼠基因敲除技術(shù)獲得2007年諾貝爾獎，該技術(shù)采用基因工程、細(xì)胞工程、雜交等手段使小鼠體內(nèi)的某一基因失去功能，以研究基因在生物個體發(fā)育和病理過程中的作用。例如現(xiàn)有基因型為BB的小鼠，要敲除基因B，可先用體外合成的突變基因b取代正�；駼，使BB細(xì)胞改變?yōu)锽b細(xì)胞，最終培育成為基因敲除小鼠。

（1）基因敲除過程中外源基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞，可利用重組質(zhì)粒上的            檢測。如果被敲除的是小鼠抑癌基因，則可能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)的                 被激活，使小鼠細(xì)胞發(fā)生癌變。

（2）通過基因敲除，得到一只AABb小鼠。假設(shè)棕毛基因A、白毛基因a、褐齒基因B和黃齒基因b均位于常染色體上，現(xiàn)要得到白毛黃齒新類型小鼠，用來與AABb小鼠雜交的純合親本的基因型是             ，雜交子代的基因型是             。讓F1代中雙雜合基因型的雌雄小鼠相互交配，子代中帶有b基因個體的概率是                      。不帶B基因個體的概率是                   。

（3）在上述F1代中只考慮齒色這對性狀，假設(shè)這對性狀的遺傳屬X染色體伴性遺傳，則表現(xiàn)黃齒個體的性別是           ，這一代中具有這種性別的個體基因是           。

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科目：高中生物 來源： 題型：

小鼠基因敲除技術(shù)獲得2007年諾貝爾獎，該技術(shù)采用基因工程、細(xì)胞工程、雜交等手段使小鼠體內(nèi)的某一基因失去功能，以研究基因在生物個體發(fā)育和病理過程中的作用。例如現(xiàn)有基因型為BB的小鼠，要敲除基因B，可先用體外合成的突變基因b取代正�；駼，使BB細(xì)胞改變?yōu)锽b細(xì)胞，最終培育成為基因敲除小鼠。

（1）體外獲得突變基因b的克隆的技術(shù)稱_________________。

（2）基因敲除過程中的受體細(xì)胞是__________________細(xì)胞。外源基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞，可利用重組質(zhì)粒上的            檢測。

（3）將導(dǎo)入目的基因的受體細(xì)胞進(jìn)行克隆，在某時期提取細(xì)胞培養(yǎng)液，測定每個細(xì)胞的DNA含量，結(jié)果如下圖。在圖中的B、C、D中，表示處于G2和M期的是     ，在_______期進(jìn)行作物（小麥、水稻）誘變育種工作實踐可取得良好效果的是。

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科目：高中生物 來源：2010屆湖南省湘潭市高三第三次模擬考試?yán)砜凭C合試題生物部分 題型：綜合題

小鼠基因敲除技術(shù)2007年獲諾貝爾獎。80年代初胚胎干細(xì)胞的分離和體外培養(yǎng)的成功奠定了基因敲除的技術(shù)基礎(chǔ)，87年Thompsson首次建立了完整的ESC基因敲除技術(shù)的模型，此后幾年中基因敲除技術(shù)得到了進(jìn)一步的發(fā)展和完善，其技術(shù)路線如下。
①胚胎干細(xì)胞的獲得；
②構(gòu)建重組基因表達(dá)載體；
③用一定方法把重組DNA轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞內(nèi)；
④用一定培養(yǎng)基篩選已擊中的細(xì)胞；
⑤將擊中的細(xì)胞轉(zhuǎn)入胚胎，通過胚胎移植使其生長為轉(zhuǎn)基因動物，然后對該動物進(jìn)行形態(tài)觀察和分子生物學(xué)檢測。
異源抗體用于人體容易發(fā)生排異反應(yīng)，若將動物抗體分子基因敲除，代之以人的抗體分子基因，那么人源抗體的產(chǎn)生將迎刃而解。根據(jù)上述材料回答下列問題：
（1）構(gòu)建重組載體過程中，為使導(dǎo)人的目的基因能完成表達(dá)，需要在目的基因的首端和尾端各插入              ；
（2）上述過程中所需的胚胎通常通過供體獲得，再將處理過的胚胎移植到受體內(nèi)培養(yǎng)，則胚胎移植前要對供體和受體進(jìn)行              處理，若想培養(yǎng)出多個性狀表現(xiàn)一致的個體，可通過              技術(shù)；
（3）應(yīng)用基因敲除技術(shù)可讓動物生產(chǎn)人源抗體，通�？蓪膭游矬w內(nèi)提取的細(xì)胞的抗體分子基因敲除，代之以人的抗體分子基因，然后將該細(xì)胞通過細(xì)胞融合技術(shù)與骨髓瘤細(xì)胞融合，再通過              、              等過程篩選出能產(chǎn)生人源抗體的細(xì)胞群，再在培養(yǎng)液或小鼠腹腔進(jìn)行培養(yǎng)，從而獲得所需抗體；
（4）用培養(yǎng)基篩選重組載體是否已擊中細(xì)胞，方法之一是啟動子缺失篩選法：原理是在重組載體的目的片段中插入一個啟動子缺失的正向選擇基因，同時目的基因片段也不包含該基因的啟動子序列。若基因載體和細(xì)胞基因組發(fā)生同源重組，則正向選擇基因可以在靶位點基因啟動子的作用下得以表達(dá)，使陽性細(xì)胞具有G418抗性（G418是一種細(xì)胞毒性藥物，對細(xì)胞有抑制或殺傷作用），從而從培養(yǎng)基中得到所需要的陽性克隆細(xì)胞，根據(jù)上述原理篩選導(dǎo)入成功的細(xì)胞的基本方法或過程是              。

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科目：高中生物 來源：2010屆湖南省湘潭市高三第三次模擬考試?yán)砜凭C合試題生物部分 題型：綜合題

小鼠基因敲除技術(shù)2007年獲諾貝爾獎。80年代初胚胎干細(xì)胞的分離和體外培養(yǎng)的成功奠定了基因敲除的技術(shù)基礎(chǔ)，87年Thompsson首次建立了完整的ESC基因敲除技術(shù)的模型，此后幾年中基因敲除技術(shù)得到了進(jìn)一步的發(fā)展和完善，其技術(shù)路線如下。

①胚胎干細(xì)胞的獲得；

②構(gòu)建重組基因表達(dá)載體；

③用一定方法把重組DNA轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞內(nèi)；

④用一定培養(yǎng)基篩選已擊中的細(xì)胞；

⑤將擊中的細(xì)胞轉(zhuǎn)入胚胎，通過胚胎移植使其生長為轉(zhuǎn)基因動物，然后對該動物進(jìn)行形態(tài)觀察和分子生物學(xué)檢測。

異源抗體用于人體容易發(fā)生排異反應(yīng)，若將動物抗體分子基因敲除，代之以人的抗體分子基因，那么人源抗體的產(chǎn)生將迎刃而解。根據(jù)上述材料回答下列問題：

（1）構(gòu)建重組載體過程中，為使導(dǎo)人的目的基因能完成表達(dá)，需要在目的基因的首端和尾端各插入               ；

（2）上述過程中所需的胚胎通常通過供體獲得，再將處理過的胚胎移植到受體內(nèi)培養(yǎng)，則胚胎移植前要對供體和受體進(jìn)行               處理，若想培養(yǎng)出多個性狀表現(xiàn)一致的個體，可通過               技術(shù)；

（3）應(yīng)用基因敲除技術(shù)可讓動物生產(chǎn)人源抗體，通�？蓪膭游矬w內(nèi)提取的細(xì)胞的抗體分子基因敲除，代之以人的抗體分子基因，然后將該細(xì)胞通過細(xì)胞融合技術(shù)與骨髓瘤細(xì)胞融合，再通過               、               等過程篩選出能產(chǎn)生人源抗體的細(xì)胞群，再在培養(yǎng)液或小鼠腹腔進(jìn)行培養(yǎng)，從而獲得所需抗體；

（4）用培養(yǎng)基篩選重組載體是否已擊中細(xì)胞，方法之一是啟動子缺失篩選法：原理是在重組載體的目的片段中插入一個啟動子缺失的正向選擇基因，同時目的基因片段也不包含該基因的啟動子序列。若基因載體和細(xì)胞基因組發(fā)生同源重組，則正向選擇基因可以在靶位點基因啟動子的作用下得以表達(dá)，使陽性細(xì)胞具有G418抗性（G418是一種細(xì)胞毒性藥物，對細(xì)胞有抑制或殺傷作用），從而從培養(yǎng)基中得到所需要的陽性克隆細(xì)胞，根據(jù)上述原理篩選導(dǎo)入成功的細(xì)胞的基本方法或過程是               。

 

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