Question

【題目】近年來煙草葉綠體基因工程在提高光合效率、抗性和品質(zhì)等方面取得了研究進展。下圖是將擬南芥果糖1，6-二磷酸醛縮酶基因（簡稱“醛縮酶基因”）轉(zhuǎn)人煙草葉綠體基因組的部分流程示意圖，請據(jù)圖同答下列問題：

（1）在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是_______圖1中，利用PCR技術(shù)擴增擬南芥醛縮酶基因時，應(yīng)選用的引物是_______。

（2）圖2重組質(zhì)粒中未標注出的必需元件還有____，構(gòu)建該重組質(zhì)料用的限制性核酸內(nèi)切酶有_______。

（3）將擬南芥醛縮酶基因?qū)�人煙草葉綠體基因組時，一般將含有目的基因的質(zhì)粒包裹在金粉上，通過轟擊進入葉綠體中，這種方法稱為_______，葉綠體基因組中存在基因區(qū)和基因間隔區(qū)，應(yīng)將目的基因?qū)�入葉綠體基因組中的基因間隔區(qū)，其原因是____。

（4）檢測目的基因是否成功導(dǎo)入受體細胞的方法是_______，該項技術(shù)用到的基因探針的制作方法是：在____上用放射性同位素等做標記。

Answer 1

【答案】加熱至90~95℃ 引物甲、引物丙 復(fù)制原點 HindⅢ和BclI 基因槍法 避免對葉綠體自身的基因組的表達造成影響 DNA分子雜交技術(shù) 含有目的基因的DNA單鏈片段（或“與目的基因互補的RNA單鏈片段”）

【解析】

（1）目的基因的獲取的方法有：從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成。

（2）基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子、標記基因和復(fù)制原點等。

（3）將目的基因?qū)�入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)�入植物細胞的方法有：農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法昰：顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物絀胞的方法是感受態(tài)細胞法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因——DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)—抗原-抗體雜交技術(shù)個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，利用高溫條件使模板DNA解鏈為單鏈，即加熱至90~95℃條件下使模板DNA解旋，圖1中，基因中兩條鏈是反向平行的，故利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，應(yīng)該選基因上下游、方向相反的一對引物，故所選的引物是引物甲、引物丙。

（2）重組質(zhì)粒應(yīng)包括目的基因、啟動子、終止子、標記基因和復(fù)制原點等，圖2重組質(zhì)粒中未標注出的必需元件還有復(fù)制原點，由圖2可知，BamHI會破壞標記基因，結(jié)合圖1目的基因兩端的限制酶切點可判斷構(gòu)建該重組質(zhì)粒用的限制性核酸內(nèi)切酶應(yīng)選擇HindIII和BclI。

（3）將目的基因?qū)�入煙草葉綠體基因組時，一般將含有目的基因的質(zhì)粒包裹在金粉上，通過轟擊進入葉綠體中，這種方法稱為基因槍法。葉綠體基因組中存在基因區(qū)和基因間隔區(qū)，為避免對葉綠體自身的基因組的表達造成影響，應(yīng)將目的基因?qū)�入葉綠體基因組中的基因間隔區(qū)。

（4）檢測目的基因是否成功導(dǎo)入受體細胞的方法是DNA分子雜交技術(shù)，在含有目的基因的DNA片段上用放射性同位素等作標記，以此作為探針。