Question

【題目】如圖為綠色熒光小鼠制備流程圖，Gfp是綠色熒光蛋白基因，請分析回答：

(1)構(gòu)建表達載體需要的酶是：__________________________________，表達載體包含綠色熒光蛋白基因Gfp、_______、_____________、終止子和復制原點等。

(2)圖中載體上的Neo基因是一種抗生素抗性基因，圖中步驟③所用的G418是一種抗生素(對細胞有毒害作用)，添加G418的目的是______________________。

(3)圖中所用的胚胎干細胞來自___________________________。

(4)圖中步驟⑤要將細胞注射入圖中囊胚的________位置，圖中步驟⑥胚胎移植前要對代孕母鼠用激素處理，目的是________。

(5)可以使用________方法在蛋白質(zhì)水平上鑒定小鼠是否存在綠色熒光蛋白。

Answer 1

【答案】 限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶 標記基因 啟動子 篩選出導入目的基因的胚胎干細胞 早期胚胎或原始性腺 內(nèi)細胞團 同期發(fā)情處理 抗原—抗體雜交

【解析】(1)構(gòu)建表達載體需要的酶有限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶，需要用限制性核酸內(nèi)切酶將目的基因和運載體切開，然后用DNA連接酶將目的基因和運載體連接起來。表達載體包含目的基因綠色熒光蛋白基因Gfp、終止子和復制原點外還需要有啟動子和標記基因。

（2）因為重組質(zhì)粒中含有抗生素的抗性基因，所以在步驟③添加G418的目的是篩選出導入目的基因的胚胎干細胞。

（3）胚胎干細胞的來源有兩個，早期胚胎或原始性腺。

（4）步驟⑤導入受體細胞使要將細胞注射入圖中囊胚的內(nèi)細胞團，因為它具有發(fā)育的全能性。圖中步驟⑥胚胎移植前要對代孕母鼠用激素處理，目的是進行同期發(fā)情處理，使生理狀況相同。

（5）在蛋白質(zhì)水平上檢測目的基因是否表達利用抗原-抗體雜交技術(shù)，如果出現(xiàn)雜交帶說明表達成功。