Question

【題目】鐵皮石斛是一種名貴中藥材，有生津養(yǎng)胃、降血糖和增強(qiáng)免疫力等作用，有效成分為石斛多糖、石斛堿等，溫州雁蕩山素有“中國鐵皮石斛之鄉(xiāng)”的美譽(yù)。請回答：

（1）用優(yōu)良品種自然生長的莖快速繁殖鐵皮石斛時，給莖消毒時無需使用的是________ (A.乙醇B.無菌水 C.甘露醇 D.次氯酸鈉)。在細(xì)胞分裂素相對較多和生長素相對較少的培養(yǎng)基中培養(yǎng)莖的切段，待長出較多的__________，將其進(jìn)行__________(處理）后再轉(zhuǎn)入__________培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)，直至長成幼苗。這種通過組織培養(yǎng)技術(shù)快速繁殖植物的方法，也稱為__________。

（2）研究發(fā)現(xiàn)，鐵皮石斛的生長發(fā)育與其體內(nèi)的內(nèi)生菌密切相關(guān)。為進(jìn)一步研究內(nèi)生菌作用, 需要大量內(nèi)生菌進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。分離內(nèi)生菌時最好采用_________ (A.G6玻璃砂漏斗過濾法 B.血細(xì)胞計數(shù)法 C.劃線分離法 D.涂布分離法），再將純化的內(nèi)生菌轉(zhuǎn)移到液體培養(yǎng)基中進(jìn)行_____________。

（3）研究發(fā)現(xiàn)，200mg/L濃度的卡那毒素能有效抑制鐵皮石斛細(xì)胞的增殖與分化�？茖W(xué)家欲利用卡那霉素，采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法對現(xiàn)有鐵皮石斛品種進(jìn)行基因改良。在基因工程操作中,導(dǎo)入受體細(xì)胞的_________分子應(yīng)同時帶有目的基因和________基因，這樣才能利用含有卡那霉素的培養(yǎng)基將成功導(dǎo)入目的基因的受體細(xì)胞篩選出來。

（4）鑒定鐵皮石斛的品質(zhì)，可通過苯酚-濃硫酸法測定石斛多糖的含量。其原理是：石斛多糖水解成單糖并脫水生成糖醛衍生物后，與苯酚縮合生產(chǎn)橙黃色化合物，在490mm處測定光密度值，以不同濃度的葡萄糖溶液為標(biāo)準(zhǔn)溶液建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，便可知道樣品的石斛多糖含量。這種方法類似于泡菜汁中_____________含量的測定，稱之為_____________法。

（5）為高效提取石斛多糖，可在提取液中加入___________，以提高鐵皮石斛的出汁率。

Answer 1

【答案】 C 叢壯苗 分株∕分株培養(yǎng) 生根 植物克隆 D 擴(kuò)大培養(yǎng) 重組DNA∕重組質(zhì)粒 卡那霉素抗性∕抗卡那霉素 亞硝酸鹽 光電比色 果膠酶∕果膠酶和果膠甲酯酶∕果膠酶和纖維素酶∕果膠酶、果膠甲酯酶和纖維素酶

【解析】試題分析：本題考查植物組織培養(yǎng)、微生物培養(yǎng)、基因工程、植物有限成分的提取，考查對相關(guān)技術(shù)原理的理解和對操作流程的識記。

（1）給莖消毒時需要使用70%的乙醇、無菌水和5%次氯酸鈉，無需使用甘露醇。細(xì)胞分裂素相對較多和生長素相對較少的培養(yǎng)基中容易生芽，待長出較多的叢壯苗，將其進(jìn)行分株∕分株培養(yǎng)后再轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)，直至長成幼苗。這種通過組織培養(yǎng)技術(shù)快速繁殖植物的方法也稱為植物克隆。

（2）涂布分離法更容易使單菌落分開，分離鐵皮石斛的內(nèi)生菌時最好采用涂布分離法。再將純化的內(nèi)生菌轉(zhuǎn)移到液體培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。

（3）導(dǎo)入受體細(xì)胞的重組DNA（重組質(zhì)粒分子）應(yīng)同時帶有目的基因和卡那霉素抗性∕抗卡那霉素基因，抗卡那霉素基因作為標(biāo)記基因，可以利用含有卡那霉素的培養(yǎng)基將成功導(dǎo)入目的基因的受體細(xì)胞篩選出來。

（4）在490mm處測定光密度值，以不同濃度的葡萄糖溶液為標(biāo)準(zhǔn)溶液建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，這種方法類似于泡菜汁中亞硝酸鹽含量的測定，稱之為光電比色法。

（5）細(xì)胞的主要成分為纖維素和果膠，植物細(xì)胞壁的存在影響細(xì)胞成分的提取，高效提取石斛多糖，可在提取液中加入果膠酶（果膠酶和果膠甲酯酶或果膠酶和纖維素酶或果膠酶、果膠甲酯酶和纖維素酶），以提高鐵皮石斛的出汁率。