Question

（6分）大腸桿菌pUC118質(zhì)粒的某限制酶唯一酶切序列，位于該質(zhì)粒的lacZ基因中，lacZ基因中如果沒有插入外源基因，lacZ基因便可表達出b-半乳糖苷酶，當(dāng)培養(yǎng)基中含有IPTG和X-gal時，X-gal便會被b-半乳糖苷酶水解成藍色，大腸桿菌將形成藍色菌落；如果lacZ基因中插入了外源基因，帶有pUC118質(zhì)粒的大腸桿菌便不能表達b-半乳糖苷酶，培養(yǎng)基中的X-gal不會被水解成藍色，大腸桿菌將形成白色菌落。pUC118還攜帶了氨芐青霉素抗性基因。右圖是利用lacZ基因的插入失活篩選重組質(zhì)粒示意圖。據(jù)圖回答下列問題：

（1）作為受體大腸桿菌應(yīng)______________________，以方便篩選已導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體大腸桿菌。取用氯化鈣溶液處理（目的是                        ）過的受體大腸桿菌，置于試管Ⅱ中，并加入                      。

（2）圖中的培養(yǎng)基中除含有大腸桿菌必需的葡萄糖、氮源、無機鹽、水、生長因子等營養(yǎng)物質(zhì)外，還應(yīng)加入___________等物質(zhì)，用以篩選導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的受體大腸桿菌。

（3）將上述處理后的大腸桿菌置于圖中選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)，以檢測受體大腸桿菌是否導(dǎo)

入重組質(zhì)粒，請預(yù)測菌落的顏色，并分析結(jié)果：

①                                                                         。

②                                                                         。

 

Answer 1

【答案】

（12分）（1）不含氨芐青霉素抗性基因（或?qū)Π逼S青霉素敏感） 增加細胞壁的通透性  在試管Ⅰ中制備好的DNA

（2）IPTG、X-gal、氨芐青霉素

（3）①若長出藍色菌落，說明 自連的運載體pUC118質(zhì)粒已轉(zhuǎn)入受體菌，但目的基因沒有轉(zhuǎn)入運載體（或說明重組質(zhì)粒沒有導(dǎo)入受體大腸桿菌）

②若長出白色菌落，說明重組質(zhì)粒已導(dǎo)入受體大腸桿菌

【解析】PUC118質(zhì)粒攜帶了氨芐青霉素抗性基因 ，受體大腸桿菌應(yīng)不含氨芐青霉素抗性基因，才能才能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上篩選出導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體大腸桿菌。用氯化鈣溶液處理增加其細胞壁的通透性過的受體大腸桿菌呈感受態(tài)，能吸收試管中的DNA，篩選導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的受體大腸桿菌，質(zhì)粒lacZ基因中插入了外源基因，帶有PUC118質(zhì)粒的大腸桿菌便不能表達β—半乳糖苷酶，培養(yǎng)基中的X—gal不會被水解成藍色，大腸桿菌將形成白色菌落，因此選擇培養(yǎng)基中還應(yīng)加入IPTG、X—gal，如果長出藍色菌落，說明自連的運載體PUC118質(zhì)粒已轉(zhuǎn)入受體菌，但目的基因沒有接入運載體或說明重組質(zhì)粒沒導(dǎo)入受體大腸桿菌；如果長出白色菌落，說明重組質(zhì)料已導(dǎo)入受體大腸桿菌。