Question

【題目】以下是生物學(xué)技術(shù)制備抗體的兩個途徑模式簡圖。

（1）上圖中過程①的完成采用的方法有：_______，依據(jù)的生物學(xué)原理_______。

（2）過程④要用到的酶有__________，過程⑥采用的方法叫__________。

上圖中的質(zhì)粒本身含有氨芐青霉素抗性基因和M、N兩種限制酶（兩種酶切割序列完全不同）切割位點。若用限制酶M和N切割，通過凝膠電泳分離，分析得如下表。

分子量（kb）	1．0	2．0	3．0	4．0	5．0	6．0	7．0	8．0	9．0	10．0
酶M	+				+					+
酶N							+		+
酶M + 酶N	+	+	+	+		+
凝膠電泳結(jié)果（1kb=1000對堿基，+表示檢測到該片段的存在

（3）該質(zhì)粒長度為_____kb，在該質(zhì)粒中，M酶與N酶的切割點分別有______、______個。

（4）氨芐青霉素抗性基因的作用是______________。

（5）在表達載體中，啟動子的作用是：__________識別和結(jié)合的部位，驅(qū)動Ⅵ基因的轉(zhuǎn)錄。

Answer 1

【答案】用聚乙二醇（PEG）、滅活的病毒 細胞膜具有流動性 逆轉(zhuǎn)錄酶、DNA聚合酶 Ca2+處理 16 3 2 作為標記基因 RNA聚合酶）

【解析】

據(jù)圖分析，細胞A表示效應(yīng)B細胞(漿細胞)，細胞Y表示雜交瘤細胞，結(jié)構(gòu)甲表示基因表達載體，①過程表示動物細胞融合，②過程表示雜交瘤細胞的培養(yǎng)，③過程表示提取信使RNA，④過程表示逆轉(zhuǎn)錄，⑤表示基因表達載體的構(gòu)建，⑥表示導(dǎo)入受體細胞。

（1）上圖中過程①過程表示動物細胞融合，采用的方法有：用聚乙二醇（PEG）、滅活的病毒，特有的方法是滅活的病毒誘導(dǎo)；依據(jù)的生物學(xué)原理細胞膜具有流動性；

（2）過程④表示逆轉(zhuǎn)錄，需要逆轉(zhuǎn)錄酶、DNA聚合酶；過程⑥為導(dǎo)入受體細胞過程，由于受體細胞是大腸桿菌細胞，所以可以采用感受態(tài)細胞法，需要用Ca2+處理大腸桿菌。

（3）該質(zhì)粒為環(huán)狀DNA，用酶M得到3個片段，則可知有質(zhì)粒上有3個酶M切點，用酶N切割產(chǎn)生了兩個片段，則說明酶N的切點有2個，用這兩種酶同時切割獲得5個片段，更進一步證明了上述推測的正確性，用酶N切割得到的兩個片段的長度分別為7和9，則該質(zhì)粒的長度為7+9=16kb。

（4）氨芐青霉素抗性基因的作用是作為標記基因，從而將導(dǎo)入重組質(zhì)粒（目的基因表達載體）的受體細胞篩選出來。

（5）在表達載體中，啟動子是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，從而驅(qū)動了Ⅵ基因的轉(zhuǎn)錄過程。