Question

【題目】草魚病毒性出血病是由草魚呼吸孤病毒（GCRV）引起的，目前尚未找到防治藥物．如圖是通過基因工程方法將PV7雙基因與某質(zhì)粒連接，并通過草魚攻毒實(shí)驗(yàn)檢測免疫保護(hù)效果的過程示意圖．圖中P10和PH為啟動子，箭頭表示轉(zhuǎn)錄方向．PV71和PV72為GCRV外殼蛋白基因（DNA片段）．請回答下列問題：

草魚病毒性出血病核酸疫苗實(shí)驗(yàn)魚的死亡率和免疫保護(hù)率記錄表

組別	疫苗注射量	實(shí)驗(yàn)魚數(shù)	死亡魚數(shù)	死亡率	免疫保護(hù)率
1	10μg	20尾	0尾	0	100%
2	30μg	20尾	0尾	0	100%
3	60μg	20尾	1尾	5%	95%
空載體	30μg	20尾	6尾	30%	70%
對照	0	20尾	20尾	100%	0

（1）制備草魚病毒性出血病核酸疫苗，獲取大量PV7雙基因時(shí)可采用PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增，該技術(shù)除需要原料、模板、________外，還必須用________酶．PCR一般要經(jīng)歷三十次以上的循環(huán)，每次循環(huán)包括變性、復(fù)性和延伸三個(gè)階段，其中復(fù)性降低溫度的作是______．

（2）使用不同的限制酶切割PV71和PV72基因，是為了防止_____________，用不同限制酶先后兩次切割質(zhì)粒，是為了防止_____________，有利于提高核酸疫苗構(gòu)建的成功率．

（3）攻毒實(shí)驗(yàn)檢測是指將不同濃度的核酸疫苗導(dǎo)入草魚體內(nèi)，通過轉(zhuǎn)錄和翻譯產(chǎn)生草魚呼腸孤病毒外殼蛋白，使草魚生成抗體和記憶細(xì)胞，同時(shí)給草魚注入相同濃度的GCRV，我，統(tǒng)計(jì)草魚免疫保護(hù)率，實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明_______________ ．導(dǎo)入空載體（普通質(zhì)粒）的草魚免疫保護(hù)率達(dá)到70%，但草魚體內(nèi)并未檢測到抗體水平的明顯增加，可能的原因是________________________．核酸疫苗注射后，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)PV7雙基因在啟動子的驅(qū)動下持續(xù)表達(dá)，至第49天核酸疫苗仍沒有被降解，仍能檢測到PV7雙基因的轉(zhuǎn)錄．綜上所述，與常規(guī)基因工程生產(chǎn)的蛋白質(zhì)疫苗相比，核酸疫苗所具備的優(yōu)點(diǎn)有_____．

Answer 1

【答案】引物熱穩(wěn)定DNA聚合（或Taq）讓引物結(jié)合與互補(bǔ)DNA鏈上連接的位置錯(cuò)誤質(zhì)粒自身環(huán)化核酸疫苗起到了保護(hù)草魚、預(yù)防草魚病毒性出血病的作用導(dǎo)入草魚體內(nèi)的空載體（普通質(zhì)粒）能提高草魚的非特異性免疫能力抗原性強(qiáng)、保護(hù)時(shí)間長、安全性好、制備和運(yùn)輸方便

【解析】

分析題圖：圖中P10和PH為啟動子，箭頭表示轉(zhuǎn)錄方向．PV71和PV72為GCRV外殼蛋白基因（DNA片段），分析表格：組別5是對照組，與對照組相比，注射疫苗量在10ug～60ug時(shí)，草魚病毒性出血病核酸疫苗實(shí)驗(yàn)魚的死亡率都幾乎為0，即免疫保護(hù)率幾乎均為100%，組別4注射導(dǎo)入普通質(zhì)粒的草魚免疫保護(hù)率達(dá)到了70%。

（1）PCR技術(shù)是一種用于放大擴(kuò)增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，PCR擴(kuò)增目的基因時(shí)，除需要原料、模板、引物外，還需熱穩(wěn)定DNA聚合酶，每次循環(huán)需經(jīng)過模板在高溫（或90-95℃、受熱）條件下變性，解旋為單鏈、復(fù)性（引物與DNA單鏈結(jié)合），熱穩(wěn)定DNA聚合酶在適當(dāng)溫度下催化DNA鏈延伸合成三步。
（2）啟動子P10能啟動PV71基因的轉(zhuǎn)錄，PH能啟動PV72基因的轉(zhuǎn)錄，用不同的限制酶切割質(zhì)粒PV71、PV72基因是為了防止連接位置錯(cuò)誤，用不同的限制酶先后兩次切割質(zhì)粒，是為了防止質(zhì)粒向身環(huán)化，還有利于提高核酸疫苗構(gòu)建的成功率。
（3）實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明核酸疫苗起到了保護(hù)草魚、預(yù)防草負(fù)病毒件出血病的作用，導(dǎo)入空載體（普通質(zhì)粒），草魚體內(nèi)并未檢測到抗體水平的明顯增加，可能的原因是空載體（普通質(zhì)粒）能提高草魚的非特異性免疫能力，所以免疫保護(hù)率提高．與常規(guī)基因工程生產(chǎn)的蛋白質(zhì)疫苗相比，核酸疫苗具有抗原性強(qiáng)、保護(hù)吋問長、安全性好、制備和運(yùn)輸方便等優(yōu)點(diǎn)。