Question

15．如圖表示利用羊生產(chǎn)抗凝血酶的過程，圖中amp^R表示氨芐青霉素抗性基因，tet^R表示四環(huán)素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ為三種限制酶及酶切位點(diǎn)，據(jù)圖回答問題：

（1）通常采用PCR技術(shù)來擴(kuò)增獲得抗凝血酶基因，其原理是DNA雙鏈復(fù)制，需要熱穩(wěn)定DNA聚合（Taq）酶．據(jù)圖分析，可將目的基因插入四環(huán)素（tet^R）抗性基因中．
（2）質(zhì)粒的化學(xué)本質(zhì)是DNA（小型環(huán)狀DNA），基因工程常用的運(yùn)載體還有λ噬菌體的衍生物、動(dòng)物或植物病毒．
（3）過程①可采用顯微注射的方法將重組質(zhì)粒導(dǎo)入羊受精卵中，可采用分子雜交技術(shù)來檢測(cè)抗凝血酶基因是否轉(zhuǎn)錄成功．

Answer 1

分析 1、基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．
2、分析題圖：圖中①表示將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞；②表示胚胎移植技術(shù)．

解答 解：（1）PCR技術(shù)可在體外大量擴(kuò)增目的基因，其原理是DNA雙鏈復(fù)制；PCR操作過程在較高溫度下進(jìn)行，因此需要熱穩(wěn)定DNA聚合（Taq） 酶．由圖可知，目的基因插入四環(huán)素（tet^R）抗性基因中．
（2）質(zhì)粒是小型環(huán)狀DNA分子；基因工程常用的運(yùn)載體還有λ噬菌體的衍生物、動(dòng)物或植物病毒．
（3）將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞常用顯微注射法；檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄可采用分子雜交技術(shù)．
故答案為：
（1）PCR    DNA雙鏈復(fù)制   熱穩(wěn)定DNA聚合（Taq）      四環(huán)素（tet^R）
（2）DNA（小型環(huán)狀DNA）   λ噬菌體的衍生物、動(dòng)物或植物病毒
（3）顯微注射    分子雜交

點(diǎn)評(píng) 本題難度適中，屬于考綱中識(shí)記、理解層次的要求，著重考查了基因工程的步驟、目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞的方法等相關(guān)知識(shí)，要求考生具有一定的識(shí)圖能力，并能識(shí)記相關(guān)基礎(chǔ)知識(shí)．