Question

【題目】CAR-T細(xì)胞是利用基因工程制備的一種T細(xì)胞，其表面的嵌合抗原受體（簡稱CAR）能直接識別腫瘤細(xì)胞的特異性靶抗原（如CD19）。研究人員嘗試用CAR-T免疫療法治療某種B細(xì)胞淋巴瘤（簡稱MCL）。請回答問題：

（1）正常的B細(xì)胞在__________免疫中識別抗原并接受T細(xì)胞產(chǎn)生的__________刺激后增殖分化為漿細(xì)胞，產(chǎn)生大量抗體。在致癌因子的作用下，B細(xì)胞由于遺傳物質(zhì)發(fā)生變化而轉(zhuǎn)化為具有無限__________能力的癌細(xì)胞，造成免疫功能受損。

（2）下圖為研究人員制備的CAR-T細(xì)胞特異性識別MCL細(xì)胞的示意圖。

把特異性識別__________的抗體基因及胞內(nèi)傳導(dǎo)信號分子基因等串聯(lián)在一起獲得融合基因，將其與特定病毒構(gòu)建成__________，導(dǎo)入體外培養(yǎng)的人T細(xì)胞中得到CD19-CAR-T細(xì)胞。提取該細(xì)胞中的__________分子，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行PCR擴(kuò)增，以檢測融合基因的表達(dá)。

（3）為研究CD19-CAR-T細(xì)胞對MCL細(xì)胞的殺傷效果，進(jìn)行了如下實驗：

①選取4種腫瘤細(xì)胞，每種各收集3管。將兩種T細(xì)胞分別與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)12小時后，統(tǒng)計各組腫瘤細(xì)胞數(shù)（用C表示），并計算殺傷率，結(jié)果如下表所示。

組別		殺傷率/%
		CD19-CAR-T細(xì)胞	未被修飾的T細(xì)胞
有CD19的腫瘤細(xì)胞（MCL細(xì)胞）	Rec-1	60	17
	Maver-1	75	32
	Jeko-1	78	30
無CD19的腫瘤細(xì)胞		24	13

表中殺傷率=（C對照組- C實驗組）/C對照組×100%，公式中的對照組為__________。上述結(jié)果表明__________。

②研究人員欲進(jìn)一步探究CD19-CAR-T細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞殺傷的機(jī)理，已知IL-2、TNF-α是兩種殺傷性細(xì)胞因子。請在下表中的空白處填寫相應(yīng)內(nèi)容，完成實驗方案。

組別	T細(xì)胞種類	腫瘤細(xì)胞種類	IL-2的釋放量	TNF-α的釋放量
甲	CD19-CAR-T細(xì)胞	ⅰ______________	1.89%	0.2%
乙	ⅱ______________	有CD19的腫瘤細(xì)胞	30.1%	32.49%

實驗證實，CD19-CAR-T細(xì)胞特異性識別CD19靶抗原進(jìn)而引起殺傷性細(xì)胞因子的大量釋放。

（4）在上述實驗的基礎(chǔ)上，欲將CAR-T免疫療法用于臨床上MCL患者的治療，還需要進(jìn)行哪些方面的研究？__________（寫出一個方面即可）。

Answer 1

【答案】 體液 淋巴因子 增殖 CD19 基因表達(dá)載體 RNA 不與T細(xì)胞共培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞 CD19-CAR-T細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷效果強(qiáng)于未被修飾的T細(xì)胞；CD19-CAR-T細(xì)胞對有CD19的腫瘤細(xì)胞的殺傷效果強(qiáng)于無CD19的腫瘤細(xì)胞 無CD19的腫瘤細(xì)胞 CD19-CAR-T細(xì)胞 在動物體內(nèi)進(jìn)行免疫治療實驗，檢測對MCL的治療效果；評估CD19-CAR-T細(xì)胞對動物體主要組織器官和正常細(xì)胞的毒理作用（合理即給分）

【解析】【試題分析】

本題結(jié)合制備能特異性識別MCL細(xì)胞的CD19-CAR-T細(xì)胞。并探究其殺傷效果及原理，綜合考查體液免疫、基因工程的相關(guān)知識，以及實驗分析能力。需要考生首先從題圖和題干中獲取有用信息，然后結(jié)合題意梳理相關(guān)知識點，構(gòu)建知識網(wǎng)絡(luò)，最后對各小題進(jìn)行分析作答。

（1）正常的B細(xì)胞在體液免疫中識別抗原并接受T細(xì)胞產(chǎn)生的淋巴因子刺激后增殖分化為漿細(xì)胞，產(chǎn)生大量抗體；在致癌因子的作用下，原癌基因和抑癌基因會發(fā)生突變，導(dǎo)致B細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生變化，進(jìn)而轉(zhuǎn)化為具有無限增殖能力的癌細(xì)胞，造成免疫功能受損。

（2）據(jù)圖可知，T細(xì)胞表面的嵌合抗原受體（簡稱CAR）能直接識別腫瘤細(xì)胞的特異性靶抗原（如CD19），所以要制備能特異性識別MCL細(xì)胞的CAR-T細(xì)胞，需要把特異性識別CD19的抗體基因及胞內(nèi)傳導(dǎo)信號分子基因等串聯(lián)在一起獲得融合基因，將其與特定病毒構(gòu)建成基因表達(dá)載體，導(dǎo)入體外培養(yǎng)的人T細(xì)胞中得到CD19-CAR-T細(xì)胞；可以提取該細(xì)胞中的RNA分子，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行PCR擴(kuò)增，以檢測融合基因的表達(dá)。

（3）①實驗中每種腫瘤細(xì)胞各收集3管，其中兩管分別與兩種T細(xì)胞共培養(yǎng)，還有一管腫瘤細(xì)胞不與T細(xì)胞共培養(yǎng)，作為空白對照。公式中的對照組即為不與T細(xì)胞共培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞；根據(jù)表中結(jié)果可知，CD19-CAR-T細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷效果強(qiáng)于未被修飾的T細(xì)胞；CD19-CAR-T細(xì)胞對有CD19的腫瘤細(xì)胞的殺傷效果強(qiáng)于無CD19的腫瘤細(xì)胞。

②欲進(jìn)一步探究CD19-CAR-T細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞殺傷的機(jī)理，即探究CD19-CAR-T細(xì)胞對癌細(xì)胞的殺傷效果高是否與腫瘤細(xì)胞的CD19有關(guān)，所以該實驗的自變量是腫瘤細(xì)胞的種類，T細(xì)胞的種類屬于無關(guān)變量，因此表格中的ⅰ處填無CD19的腫瘤細(xì)胞；ⅱ處填CD19-CAR-T細(xì)胞。

（4）欲將CAR-T免疫療法用于臨床上MCL患者的治療，還需要在動物體內(nèi)進(jìn)行免疫治療實驗，檢測對MCL的治療效果；評估CD19-CAR-T細(xì)胞對動物體主要組織器官和正常細(xì)胞的毒理作用。