Question

【題目】GRFT是一種來源于紅藻的外源凝集素，能作為治療艾滋病的候選藥物。某實(shí)驗(yàn)小組將GRFT基因?qū)�入煙草�?xì)胞的染色體基因組中，發(fā)現(xiàn)煙草中GRFT基因的表達(dá)量可達(dá)60%~90%。請(qǐng)回答下列問題：

（1）將GRFT基因?qū)�入煙草�?xì)胞的染色體基因組的方法為__________，該方法能將GRFT基因?qū)�人煙草�?xì)胞的染色體基因組，利用的是T—DNA具有_________的特點(diǎn)。

（2）構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)可插入NPTII基因，具有該基因的轉(zhuǎn)基因植物的葉綠體離體培養(yǎng)時(shí)會(huì)出現(xiàn)退綠現(xiàn)象，據(jù)此可知重組質(zhì)粒中的NPTII基因?qū)嵸|(zhì)上是一種_________，其作用是_________�；�因工程中的運(yùn)載體除了質(zhì)粒外，還有___________。

（3）欲大量獲得GRFT，可利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)將轉(zhuǎn)基因煙草細(xì)胞培育到______階段，原因是該階段的細(xì)胞具有______________________的特點(diǎn)。

Answer 1

【答案】農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上 標(biāo)記基因 鑒別受體細(xì)胞中是否有目的基因，從而將含自的基因的細(xì)胞篩選出來 動(dòng)植物病毒以及λ噬菌體的衍生物 愈傷組織 分裂、代謝旺盛

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。

（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。

（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）將GRFT基因?qū)�入煙草�?xì)胞的染色體基因組的方法為農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，該方法能將GRFT基因?qū)�入煙草�?xì)胞的染色體基因組，農(nóng)桿菌中Ti質(zhì)粒上的T-DNA具有可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上的特點(diǎn)。

（2）構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)可插入NPTII基因，具有該基因的轉(zhuǎn)基因植物的葉綠體離體培養(yǎng)時(shí)會(huì)出現(xiàn)退綠現(xiàn)象，據(jù)此可知重組質(zhì)粒中的NPTII基因?qū)嵸|(zhì)上是一種標(biāo)記基因，其作用是鑒別受體細(xì)胞中是否有目的基因，從而將含自的基因的細(xì)胞篩選出來�；�因工程中的運(yùn)載體除了質(zhì)粒外，還有動(dòng)植物病毒以及λ噬菌體的衍生物。

（3）欲大量獲得GRFT，可利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)將轉(zhuǎn)基因煙草細(xì)胞培育到愈傷組織階段;原因是該階段的細(xì)胞分裂、代謝旺盛，可從培養(yǎng)液中大量獲得GRFT。