Question

下面是將乙肝病毒控制合成病毒表面主蛋白的基因HBsAg導(dǎo)入巴斯德畢赤酵母菌生產(chǎn)乙肝疫苗的過程及有關(guān)資料，請分析回答下列問題。

【資料1】巴斯德畢赤酵母菌是一種甲基營養(yǎng)型酵母菌，能將甲醇作為其唯一碳源，此時AOX1基因受到誘導(dǎo)而表達【5’AOX1和3’AOX1（TT）分別是基因AOX1的啟動子和終止子】。

【資料2】巴斯德畢赤酵母菌體內(nèi)無天然質(zhì)粒，所以科學(xué)家改造出了圖1所示的pPIC9K質(zhì)粒用作載體，其與目的基因形成的重組質(zhì)粒經(jīng)酶切后可以與酵母菌染色體發(fā)生同源重組，將目的基因整合于染色體中以實現(xiàn)表達。

（1）如果要將HBsAg基因和pPIC9K質(zhì)粒重組，應(yīng)該在HBsAg基因兩側(cè)的A和B位置接上             、            限制酶識別序列， 這樣設(shè)計的優(yōu)點是避免質(zhì)粒和目的基因自身環(huán)化。

（2）酶切獲取HBsAg基因后，需用                將其連接到pPIC9K質(zhì)粒上，形成重組質(zhì)粒，并將其導(dǎo)入大腸桿菌以獲取                。

（3）步驟3中應(yīng)選用限制酶            來切割重組質(zhì)粒獲得重組DNA，然后將其導(dǎo)入巴斯德畢赤酵母菌細胞。

（4）為了確認巴斯德畢赤酵母菌轉(zhuǎn)化是否成功，在培養(yǎng)基中應(yīng)該加入卡拉霉素以便篩選，轉(zhuǎn)化后的細胞中是否含有HBsAg基因，可以用                    方法進行檢測。

（5）轉(zhuǎn)化的酵母菌在培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時間后，需要向其中加入            以維持其生活，同時誘導(dǎo)HBsAg基因表達。

（6）與大腸桿菌等細菌相比，用巴斯德畢赤酵母菌細胞作為基因工程的受體細胞，其優(yōu)點是在蛋白質(zhì)合成后，細胞可以對其進行                并分泌到細胞外，便于提取。

 

Answer 1

【答案】

（1）SnaB    AvrⅡ   （2）DNA連接酶     大量重組質(zhì)粒  （3）BglⅡ

（4）DNA分子雜交    （5）甲醇          （6）加工（修飾）

【解析】（1）為了避免質(zhì)粒和目的基因自身環(huán)化，應(yīng)選擇雙酶切，目的基因應(yīng)插入在啟動子和終止子之間，所以應(yīng)在HBsAg基因兩側(cè)的A和B位置接上SnaB和AvrⅡ限制酶識別序列。

（2）連接兩個DNA片段的酶是DNA連接酶；將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌的目的是進行復(fù)制，以獲取大量的重組質(zhì)粒。

（3）切割后形成的黏性末端包括5’AOX1和3’AOX1，則選擇的限制酶應(yīng)是BglⅡ。

（4）檢測受體細胞中是否含有目的基因，其方法是DNA分子雜交法。

（5）巴斯德畢赤酵母菌是一種甲基營養(yǎng)型酵母菌，能將甲醇作為其唯一碳源。

（6）細菌沒有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，而酵母菌是真核生物，有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，能夠?qū)Ψ置诘鞍走M行加工修飾。