Question

【題目】下圖是轉(zhuǎn)基因獼猴培養(yǎng)過(guò)程示意圖，請(qǐng)據(jù)圖回答：

（1）獲取綠色熒光蛋白基因的方法包括____________、利用 PCR 技術(shù)擴(kuò)增和用化學(xué)方法 直接人工合成等�；�因工程的核心步驟是________________________用圖中數(shù)字表示），②過(guò)程常用的方法是________________________________________________。

（2）從分子水平檢測(cè)目的基因是否成功導(dǎo)入受體細(xì)胞的方法是__________________ 技術(shù)。

（3）利用 PCR 技術(shù)擴(kuò)增目的基因的前提是要有一段已知的目的基因核苷酸序列，根據(jù)這 一序列設(shè)計(jì)并合成________________________________________________。

（4）從雌性獼猴體內(nèi)采集的卵母細(xì)胞，一般要培養(yǎng)到____________ 階段才能進(jìn)行體外受 精。判斷卵子受精的重要標(biāo)志是____________________________________。

（5）圖中過(guò)程⑦稱為____________ ，所用的早期胚胎通常是發(fā)育至____________ 期的胚 胎，受體雌猴對(duì)移入子宮的外來(lái)胚胎不會(huì)發(fā)生 ____________反應(yīng)，這為胚胎在受體雌猴體 內(nèi)的存活提供了可能。

Answer 1

【答案】從基因文庫(kù)中獲取 ① 顯微注射法 DNA分子雜交 （成對(duì)的）引物 減數(shù)第二次分裂中期（MⅡ中期） 在卵細(xì)胞膜和透明帶的間隙可以觀察到兩個(gè)極體 胚胎移植　 囊胚（或桑椹胚） 免疫排斥

【解析】

圖示為轉(zhuǎn)基因獼猴的培育過(guò)程示意圖。標(biāo)記基因的作用：是為了鑒定受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來(lái)。

基因工程技術(shù)的基本步驟：目的基因的獲取→基因表達(dá)載體的構(gòu)建→將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞→目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因用DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA用分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)用抗原—抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的縮寫，其擴(kuò)增目的基因的原理是： DNA半保留復(fù)制的原理。擴(kuò)增目的基因的前提是：要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成（成對(duì)的）引物。反應(yīng)需要：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對(duì)引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）。

胚胎移植，又稱受精卵移植，是指將雌性動(dòng)物的早期胚胎，或者通過(guò)體外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同種的、生理狀態(tài)相同的雌性動(dòng)物體內(nèi)，使之繼續(xù)發(fā)育為新個(gè)體的技術(shù)。相關(guān)技術(shù)包括：同期發(fā)情、超數(shù)排卵、胚胎的收集和移植（卵母細(xì)胞的體外成熟、精子的體外獲能、體外受精、受精卵的體外培養(yǎng)和移植等一系列步驟）。

（1）綠色熒光蛋白基因?yàn)槟康幕�因，獲取目的基因的方法包括：從基因文庫(kù)中獲取目的基因、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因和用化學(xué)方法直接人工合成等；基因工程的核心步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建，即圖示中的①過(guò)程。②過(guò)程是將目的基因?qū)�入受精卵這一受體細(xì)胞，常用的方法是顯微注射法；

（2）目的基因的檢測(cè)與鑒定分為分子水平上的檢測(cè)和個(gè)體水平上的鑒定。分子水平檢測(cè)目的基因是否成功導(dǎo)入受體細(xì)胞的方法是DNA分子雜交技術(shù)；

（3）PCR擴(kuò)增目的基因的前提是：要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成（成對(duì)的）引物。

（4）受體細(xì)胞常選處在MⅡ中（減數(shù)第二次分裂中）期的去核卵母細(xì)胞，通過(guò)電脈沖（或電刺激）進(jìn)行激活，使其完成減數(shù)分裂和發(fā)育進(jìn)程；受精過(guò)程包括5個(gè)階段：1、精子穿過(guò)放射冠 2、精子穿過(guò)透明帶 3、精子進(jìn)入卵黃 4、原核形成 5、配子融合。是否完成受精的標(biāo)志是：在卵黃膜和透明帶的間隙可以觀察到二個(gè)極體；

（5）圖中過(guò)程⑦為胚胎移植，所用的早期胚胎通常是發(fā)育至桑椹胚或囊胚期的胚胎，由于胎盤屏障等原因，受體雌猴對(duì)移入子宮的外來(lái)胚胎不會(huì)發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，這為胚胎在受體雌猴內(nèi)的存活提供了可能。