Question

【題目】某學校有三個興趣小組，第一小組用新鮮的泡菜濾液為實驗材料分離純化乳酸菌；第二小組從富含纖維素的土壤中分離獲得纖維素分解菌單菌落；第三小組從土壤中篩選產(chǎn)脲酶細菌。請回答下列問題：

（1）第一小組分離純化乳酸菌時，首先用無菌水對泡菜濾液進行梯度稀釋的理由是____________________。分離純化乳酸菌所用固體培養(yǎng)基中加入____________可中和產(chǎn)生的乳酸，分離純化時選擇具有透明圈的菌落作為候選菌。

（2）第二小組土壤采樣后，通過選擇培養(yǎng)增加纖維素分解菌的濃度，之后，在培養(yǎng)基中加入____________進行顏色反應(yīng)直接篩選纖維素分解菌，該培養(yǎng)基從功能上看屬于_________，為確定得到的是纖維素分解菌，還需要進行_________的實驗。

（3）第三小組選擇培養(yǎng)基應(yīng)該以__________為唯一氮源，鑒別培養(yǎng)基需添加__________作為指示劑。在5個細菌培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋倍數(shù)為105的土壤樣品0．1mL，培養(yǎng)一段時間統(tǒng)計菌落數(shù)量。該過程采取的接種方法是__________。

Answer 1

【答案】泡菜濾液中菌的濃度高，直接培養(yǎng)很難分離得到單菌落 碳酸鈣 剛果紅 鑒別培養(yǎng)基 發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶 尿素 酚紅 稀釋涂布平板法

【解析】

稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落。用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中的細菌數(shù)時，在每一個梯度濃度內(nèi)，至少要涂布3個平板，選擇菌落數(shù)在30～300的進行記數(shù)，求平均值，再通過計算得出土壤中細菌總數(shù)。

泡菜發(fā)酵的實驗原理：（1）乳酸菌在無氧條件下，將糖分解為乳酸。（2）利用乳酸菌制作泡菜的過程中會引起亞硝酸鹽的含量的變化。溫度過高、食鹽用量不足10%、腌制時間過短，容易造成細菌大量繁殖，亞硝酸鹽含量增加。一般在腌制10天后，亞硝酸鹽的含量開始下降。

尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上，只有能分解尿素的菌才能以尿素作為氮源生長繁殖，不能分解尿素的菌因缺乏氮源無法生長繁殖，因此分離出土壤中分解尿素的細菌，應(yīng)該用尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基進行分離，分解尿素的菌在分解尿素時產(chǎn)生氨氣，使酚紅指示劑顯紅色，所以要加入酚紅指示劑進行鑒別。

對纖維素分解菌進行篩選的實驗流程為:土壤取樣—選擇培養(yǎng)—梯度稀釋 —將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上—挑選產(chǎn)生透明圈的菌落。

（1）分離純化乳酸菌時，首先要用無菌水對泡菜濾液進行梯度稀釋。泡菜濾液中乳酸菌的濃度高，直接分離很難分離到單個菌落，因此需要對泡菜濾液進行梯度稀釋；在分離純化所用的培養(yǎng)基中加入碳酸鈣可中和乳酸菌代謝過程中產(chǎn)生的乳酸且利于乳酸菌的識別。

（2）篩選纖維素分解菌一般用剛果紅染料進行鑒定，為確定得到的是纖維素分解菌，還需進行發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的實驗。

（3）第三小組要篩選尿素分解菌，應(yīng)以尿素為唯一氮源，鑒別培養(yǎng)基需添加酚紅作為指示劑（觀察是否變紅）；題干提到了稀釋，因此這里的接種方法為稀釋涂布平板法。