Question

【題目】pBV220載體是我國預防醫(yī)學科學院病毒研究所自行構建并廣泛應用的大腸桿菌溫控載體，大小為3 666 bp（bp表示堿基對），其結構如下圖所示。圖中PRPL是啟動子，rrB是基因轉錄終止信號，Ampr是氨芐抗性基因，ori是質粒復制起點，EcoR Ⅰ、Hind Ⅲ等為各種限制性內切酶。請據(jù)圖回答下列有關問題：

（1）基因工程的核心步驟是____________________________________。

（2）從圖中可看出，pBV220作為運載體具備的條件有________、________。

（3）該質�？杀籄、B、C三種限制性內切酶同時切割。單獨A切割得一條長鏈，單獨B切也得一條長鏈，A和C同時切割得2個500 bp和1個2 666 bp片段，B和C同時切割得2個250 bp和1個3 166 bp片段。若以A的切割位點為計算起點，則B的切割位點與A點最短長度為________，C的兩個切割位點與A點的最短距離分別為________、________

（4）PR和PL都是啟動子，pBV220載體構建過程中把兩個啟動子串聯(lián)在一起，形成了雙啟動子，雙啟動子的作用可能是________。溫控基因CIts857編碼對溫度敏感的CIts蛋白，CIts在30℃時具有抑制啟動子的活性，在42℃時失活。促進工程菌目的基因表達的誘導溫度為________。

Answer 1

【答案】 構建目的基因的表達載體 多個限制性內切酶的切割位點 標記基因 750 bp 500 bp 1 000 bp 保證目的基因的高水平表達（高效轉錄） 42℃

【解析】本題考查基因工程，要求考生理解基因工程的操作程序，明確運載體必需具備的條件，能根據(jù)題意計算質粒中的不同的酶切位點的位置關系，進而分析、解答問題。

（1）基因工程的核心步驟是構建目的基因的表達載體。

（2）從圖中可看出，pBV220作為運載體具備的條件有多個限制性內切酶的切割位點（便于目的基因的插入）、具有標記基因即氨芐抗性基因Ampr（便于鑒定和篩選含有目的基因的受體細胞）。

（3）單獨A切割得一條長鏈，單獨B切也得一條長鏈，A和C同時切割得2個500bp和1個2666bp片段，B和C同時切割得2個250bp和1個3166bp片段，這說明該質粒上有一個A酶切割位點、一個B酶切割位點、2個C酶切割位點；A和C同時切割得2個500bp和1個2666bp片段，說明A和C酶的一個切點之間的長度為500bp；B和C同時切割得2個250bp和1個3166bp片段，說明B和C酶的一個切點之間的長度為250bp；若以A的切割位點為計算起點，則B的切割位點與A點最短長度為500+250=750bp，C的兩個切割位點與A點的最距離分別為500bp、1000bp。

（4）PR和PL都是啟動子，pBV220載體構建過程中把兩個啟動子串聯(lián)在一起，形成了雙啟動子，雙啟動子的作用可能是保證目的基因的高水平表達（高效轉錄）；溫控基因CIts857編碼對溫度敏感的CIts蛋白，CIts在30℃時具有抑制啟動子的活性，在42℃時失活，因此要促進工程菌目的基因表達就要使CIts蛋白失活，即促進工程菌目的基因表達的誘導溫度為42℃。