Question

【題目】大腸桿菌是國際上公認(rèn)的衛(wèi)生監(jiān)測指示菌，用于指示食品、飲用水等是否直接或間接受到了糞便的污染。少數(shù)微生物能分解乳糖，有些只產(chǎn)酸（酸性物質(zhì)），有些只產(chǎn)氣（氣體），而大腸桿菌既能產(chǎn)酸又能產(chǎn)氣，且產(chǎn)生的酸性物質(zhì)能與伊紅美藍(lán)反應(yīng)而呈現(xiàn)黑色。某小組為檢測某水體中大腸桿菌的污染狀況，選用了如下兩種培養(yǎng)基。

培養(yǎng)基名稱	配方（L-1）	pH
乳糖蛋白胨培養(yǎng)基	蛋白胨10g，乳糖5g，牛肉膏3g，NaCl 5g，溴甲酚紫0.016g	7.4
伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基	蛋白胨10g，乳糖10g，KH2PO4 5g，伊紅0.4g，美藍(lán)0.065g，瓊脂15g	7.4

回答下列問題：

（1）從物理性質(zhì)上看，兩種培養(yǎng)基的類型__________（填“相同”或“不同”）。在乳糖蛋白胨培養(yǎng)基中，為微生物的生長提供氮源的物質(zhì)有__________；NaCl除了提供無機鹽外，還具有_________作用。

（2）乳糖蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌時，不選用121℃高壓滅菌15 min的方法，而是選用115℃滅菌20 min，推測可能的原因是___________。

（3）某小組取兩支含乳糖蛋白胨培養(yǎng)基的試管A和B，A管中加入1mL待測水樣，B管不作處理，然后都放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。已知溴甲酚紫在酸性時呈黃色，堿性時（pH高于6.8）呈紫色。若出現(xiàn)_________時，則提示水樣可能被大腸桿菌污染。

（4）該小組為計數(shù)大腸桿菌的數(shù)目，同時還各取0.1 mL水樣直接涂布到三個伊紅美藍(lán)平板培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，分別統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)為34、36、38，估算出每毫升水樣中含360個大腸桿菌。有同學(xué)指出，估算的大腸桿菌數(shù)目不可信，其原因有___________、__________。

Answer 1

【答案】不同 蛋白胨、牛肉膏 維持細(xì)胞滲透壓 培養(yǎng)基中有不耐高溫（121℃）的物質(zhì) A管呈黃色并產(chǎn)氣，B管呈紫色不產(chǎn)氣 應(yīng)統(tǒng)計平板上呈現(xiàn)黑色的菌落 缺少不接種的空白對照

【解析】

1.培養(yǎng)基，是指供給微生物、植物或動物（或組織）生長繁殖的，由不同營養(yǎng)物質(zhì)組合配制而成的營養(yǎng)基質(zhì)。一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機鹽（包括微量元素）、維生素和水等幾大類物質(zhì)。培養(yǎng)基既是提供細(xì)胞營養(yǎng)和促使細(xì)胞增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，也是細(xì)胞生長和繁殖的生存環(huán)境。培養(yǎng)基種類很多，根據(jù)配制原料的來源可分為自然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基；根據(jù)物理狀態(tài)可分為固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基；根據(jù)培養(yǎng)功能可分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基等；根據(jù)使用范圍可分為細(xì)菌培養(yǎng)基、放線菌培養(yǎng)基、酵母菌培養(yǎng)基、真菌培養(yǎng)基等。培養(yǎng)基配成后一般需測試并調(diào)節(jié)pH，還須進(jìn)行滅菌，通常有高溫滅菌和過濾滅菌。培養(yǎng)基由于富含營養(yǎng)物質(zhì)，易被污染或變質(zhì)。配好后不宜久置，最好現(xiàn)配現(xiàn)用。

2.稀釋涂布平板法：稀釋平板計數(shù)是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的單個菌落，即是由一個單細(xì)胞繁殖而成這一培養(yǎng)特征設(shè)計的計數(shù)方法，即一個菌落代表一個單細(xì)胞。計數(shù)時，首先將待測樣品制成均勻的系列稀釋液，盡量使樣品中的微生物細(xì)胞分散開，使成單個細(xì)胞存在（否則一個菌落就不只是代表一個細(xì)胞），再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布于平板中的培養(yǎng)基內(nèi)。經(jīng)培養(yǎng)后，由單個細(xì)胞生長繁殖形成菌落，統(tǒng)計菌落數(shù)目，即可計算出樣品中的含菌數(shù)。此法所計算的菌數(shù)是培養(yǎng)基上長出來的菌落數(shù)，故又稱活菌計數(shù)。一般用于某些成品檢定（如殺蟲菌劑等）、生物制品檢驗、土壤含菌量測定及食品、水源的污染程度的檢驗。

（1）從物理性質(zhì)上看，兩種培養(yǎng)基的類型不同，乳糖蛋白胨培養(yǎng)基是液體培養(yǎng)基，伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基。在乳糖蛋白胨培養(yǎng)基中，蛋白胨、牛肉膏含有豐富的蛋白質(zhì)，為微生物的生長提供氮源；NaCl除了提供無機鹽外，Na+還具有維持細(xì)胞滲透壓作用。

（2）乳糖蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌時，不選用121℃高壓滅菌15 min的方法，而是選用115℃滅菌20 min，推測可能的原因是培養(yǎng)基中有不耐高溫（121℃）的物質(zhì)，如乳糖蛋白胨培養(yǎng)基的成分中含有乳糖，121℃滅菌會使乳糖會降解，碳化。

（3）某小組取兩支含乳糖蛋白胨培養(yǎng)基的試管A和B，A管中加入1mL待測水樣，B管不作處理，然后都放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。已知溴甲酚紫在酸性時呈黃色，堿性時（pH高于6.8）呈紫色，大腸桿菌既能產(chǎn)酸又能產(chǎn)氣，若出現(xiàn)A管呈黃色并產(chǎn)氣，B管呈紫色不產(chǎn)氣，則提示水樣可能被大腸桿菌污染。

（4）該小組為計數(shù)大腸桿菌的數(shù)目，同時還各取0.1 mL水樣直接涂布到三個伊紅美藍(lán)平板培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，分別統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)為34、36、38，估算出每毫升水樣中含360個大腸桿菌。有同學(xué)指出，估算的大腸桿菌數(shù)目不可信，其原因有：大腸桿菌產(chǎn)生的酸性物質(zhì)能與伊紅美藍(lán)反應(yīng)而呈現(xiàn)黑色，故應(yīng)統(tǒng)計平板上呈現(xiàn)黑色的菌落，缺少不接種的空白對照，未排除其他因素的干擾。