Question

9．微生物與生物工程
Ⅰ、研究者從熱泉中篩選了高效產(chǎn)生高溫淀粉酶的嗜熱菌，其篩選過程如圖1所示．

（1）①過程稱為稀釋，②過程是為了篩選獲得單個(gè)菌落．在1號(hào)培養(yǎng)基上挑出能產(chǎn)生淀粉酶的嗜熱菌菌落的鑒別方法是培養(yǎng)基上會(huì)出現(xiàn)以該菌的菌落為中心的透明圈．
（2）按功能分Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基稱為選擇培養(yǎng)基；該培養(yǎng)基中必須添加的成分有ACD（多選）等．
A．瓊脂B．葡萄糖C．硝酸銨D．淀粉
（3）一般對(duì)配制的培養(yǎng)基采用高壓滅菌，其中“高壓”是為了殺死培養(yǎng)基中的細(xì)菌芽孢．
Ⅱ、圖2為單克隆抗體制備過程的示意圖
（4）若只考慮細(xì)胞的兩兩融合，試管中有3種融合細(xì)胞，篩選后進(jìn)一步培養(yǎng)的是骨髓雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞，此細(xì)胞的特點(diǎn)是既能產(chǎn)生單一抗體，又能體外快速增殖．
（5）相對(duì)細(xì)菌而言，動(dòng)物細(xì)胞離體培養(yǎng)更需關(guān)注培養(yǎng)基的滲透壓，這是因?yàn)閯?dòng)物細(xì)胞C．
A．滲透壓遠(yuǎn)高于細(xì)菌或植物細(xì)胞的滲透壓
B．沒有成熟大液泡，滲透壓調(diào)節(jié)能力差
C．沒有細(xì)胞壁，對(duì)培養(yǎng)基的滲透壓更敏感
D．生長(zhǎng)緩慢，各生長(zhǎng)階段對(duì)環(huán)境的滲透壓要求不同
（6）已知細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷．人淋巴細(xì)胞中有這兩種DNA的合成途徑，但一般不分裂增殖；鼠骨髓瘤細(xì)胞中沒有S途徑，但能不斷分裂增殖．寫出過程I分離篩選出雜種細(xì)胞的方法培養(yǎng)液中加入氨基嘌呤，收集增殖的細(xì)胞．

Answer 1

分析 微生物篩選培養(yǎng)成功的關(guān)鍵是防止雜菌污染培養(yǎng)物和操作者，必須要做好相應(yīng)的消毒或滅菌及嚴(yán)格的無(wú)菌操作．從混雜的微生物中篩選目的微生物的一般步驟是：樣品取樣、選擇培養(yǎng)、梯度稀釋、涂布培養(yǎng)和篩選菌株．培養(yǎng)基制作完成后要調(diào)整pH，再滅菌，該篩選要使用以淀粉為唯一的碳源的選擇培養(yǎng)基．
單克隆抗體制備過程中需要進(jìn)行兩次篩選：第一次是篩選出雜交瘤細(xì)胞，第二次是篩選出能夠產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞．

解答 解：（1）①過程稱為稀釋，②過程表示稀釋涂布平板，該過程能篩選并獲得單個(gè)菌落．根據(jù)題意可知，該嗜熱菌能夠產(chǎn)生淀粉酶，因此在Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基上挑出能產(chǎn)生淀粉酶的嗜熱菌菌落的鑒別方法是培養(yǎng)基上會(huì)出現(xiàn)以該菌的菌落為中心的透明圈．
（2）按功能分Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基稱為選擇培養(yǎng)基；該培養(yǎng)基中必須添加以淀粉為糖原的唯一碳源，另外還需要加入瓊脂作為凝固劑，以及硝酸銨作為氮源，而不添加葡萄糖．
（3）一般對(duì)配制的培養(yǎng)基采用高壓滅菌，其中“高壓”是為了殺死培養(yǎng)基中的細(xì)菌芽孢．
（4）若只考慮細(xì)胞的兩兩融合，試管中有3種融合細(xì)胞，即雜交瘤細(xì)胞、B細(xì)胞自身融合細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞，篩選后進(jìn)一步培養(yǎng)的是骨髓雜交瘤細(xì)胞，該細(xì)胞既能產(chǎn)生單一抗體，又能體外快速增殖．
（5）動(dòng)物細(xì)胞無(wú)細(xì)胞壁，培養(yǎng)液滲透壓較低時(shí)，動(dòng)物細(xì)胞會(huì)吸水漲破，而細(xì)菌細(xì)胞含有細(xì)胞壁，則不會(huì)出現(xiàn)吸水漲破的情況，所以動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基要特別關(guān)注滲透壓．
（6）在培養(yǎng)液中加入氨基嘌呤，培養(yǎng)后收集增殖細(xì)胞．加入氨基嘌呤后，使D合成途徑阻斷，僅有D全合成途徑的骨髓細(xì)胞及其彼此融合的細(xì)胞就不能增殖，淋巴細(xì)胞一般不分裂增殖．因此培養(yǎng)液中加入該物質(zhì)后，不能生長(zhǎng)的細(xì)胞有骨髓瘤細(xì)胞、融合的淋巴細(xì)胞、融合的骨髓瘤細(xì)胞、淋巴細(xì)胞．人淋巴細(xì)胞和骨髓癌細(xì)胞融合后的雜種細(xì)胞中可以利用淋巴細(xì)胞中的S途徑合成DNA而增殖，因此只有雜種細(xì)胞能生長(zhǎng)．
故答案為：
（1）稀釋    篩選獲得單個(gè)菌落   透明圈  
（2）選擇培養(yǎng)基    ACD
（3）殺死培養(yǎng)基中的細(xì)菌芽孢  
（4）3   骨髓雜交瘤細(xì)胞    既能產(chǎn)生單一抗體，又能體外快速增殖
（5）C  
（6）培養(yǎng)液中加入氨基嘌呤，收集增殖的細(xì)胞

點(diǎn)評(píng) 本題考查了微生物的分離與純化以及單克隆抗體制備的有關(guān)知識(shí)，要求考生能夠題干和題圖信息解決微生物培養(yǎng)的相關(guān)試題，掌握單克隆抗體制備的過程，識(shí)記最終獲得的雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)．