Question

【題目】如圖是利用轉(zhuǎn)基因技術生產(chǎn)干擾素的簡化流程�；卮鹣铝袉栴}：

（1）進行過程I的前提是要根據(jù)干擾素基因的____________設計引物。

（2）過程I需加熱至90~95℃，然后冷卻至55~60℃，如此操作的目的是____________。據(jù)圖可知欲獲得干擾素基因，至少需要復制____________次。

（3）圖中A的名稱是___________，A上與RNA聚合酶識別和結合的部位稱為___________。

（4）為檢測干擾素基因在酵母菌細胞中是否轉(zhuǎn)錄，可用_____________作探針，與從細胞中提取的____________進行分子雜交。

Answer 1

【答案】核苷酸序列 使DNA解鏈，然后使引物結合到互補DNA鏈上 3 重組質(zhì)粒 啟動子 放射性同位素、生物素或熒光染料等標記的干擾素（目的）基因 mRNA

【解析】

1.基因工程的基本操作程序：第一步：目的基因的獲��；第二步：基因表達載體的構建；第三步：將目的基因?qū)�入受體細胞；第四步：目的基因的檢測和表達。

2.PCR的過程：①高溫變性：DNA解旋過程；②低溫復性：引物結合到互補鏈DNA上；③中溫延伸：合成子鏈。PCR擴增中雙鏈DNA解開不需要解旋酶，高溫條件下氫鍵可自動解開。

3.題圖Ⅰ是利用PCR技術擴增目的基因，Ⅱ是構建基因表達載體，Ⅲ是將重組質(zhì)粒導入到酵母菌細胞中。

（1）PCR的前提條件是要有一段已知目的基因的核苷酸序列以便合成一對引物，因此進行過程Ⅰ的前提是要根據(jù)干擾素基因的核苷酸序列設計引物。

（2）PCR過程中需加熱至9095℃，然后冷卻至5560℃，如此操作的目的是使DNA解旋，然后使引物結合到互補DNA鏈上。根據(jù)PCR復制的特點，結合圖示可知，圖示中干擾素基因的兩條鏈應是第二次復制才能形成的子鏈，所以至少需要復制三次才能形成圖中的干擾素基因。

（3）圖中A是干擾素基因和質(zhì)粒連接形成的重組質(zhì)粒（基因表達載體），A上與RNA聚合酶識別和結合的部位稱為啟動子。

（4）基因轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物為mRNA，由于轉(zhuǎn)錄過程中遵循堿基互補配對原則，所以為檢測干擾素基因在酵母菌細胞中是否轉(zhuǎn)錄，可用放射性同位素、生物素或熒光染料等標記的干擾素（目的）基因作探針，與從細胞中提取的mRNA進行分子雜交。