Question

【題目】轉基因抗除草劑玉米培育過程如下，請回答下列問題。

（Ampx表示氨卡青霉素抗性基因 Tetr表示四環(huán)素抗性基因）

（1）為了讓目的基因與質粒DNA合理重組，同時便于篩選重組質粒，選用的限制酶最可能為_______。

（2）外源基因導入受體菌后需要進行篩選，如用含氨卡青霉素的培養(yǎng)基進行篩選，能篩選出含有插入了目的基因的重組質粒和_________的單菌落，若要篩選含有重組質粒的單菌落，還需要使用含有_____-的固體培養(yǎng)基。

（3）含有目的基因的農桿菌侵染愈傷組織后，篩選轉化的愈傷組織，需要使用含______的選擇培養(yǎng)基。由愈傷組織形成完整植株的途徑有兩條，一條是器官發(fā)生途徑，另一條是______途徑。具體通過哪一條途徑主要取決于培養(yǎng)基成分中________的種類及其濃度配比。

（4）得到再生植株后，要確認目的基因是否在再生植株中正確表達，應檢測此再生植株中該基因的_______。如果檢測結果呈陽性，再在田間試驗檢測植株的抗性。

Answer 1

【答案】酶F、酶G 質粒 四環(huán)素 除草劑 胚狀體發(fā)生途徑 激素 表達產物

【解析】

依題圖可知，構建基因表達載體是基因工程中的關鍵步驟，其中所選的限制酶既能切下目的基因，又不會破壞質粒上的標記基因；需要根據(jù)標記基因所表達的標記性狀篩選含有重組質粒的受體細胞；根據(jù)目的基因在受體細胞內是否表達出產物來判斷轉基因抗除草劑玉米是否培育成功。以此基因工程中相關知識做出解答。

（1）依題圖可知，為了讓目的基因與質粒DNA合理重組，同時便于篩選重組質粒，做到既能得到目的基因，又不破壞質粒上的標記基因，所以選用的限制酶最可能為酶F和酶G。

（2）識圖可知，表達載體上含有完整的氨卡青霉素抗性基因而四環(huán)素抗性基因被破壞，所以用含氨卡青霉素的培養(yǎng)基對受體菌進行篩選，能篩選出含有插入了目的基因的重組質粒和質粒的單菌落，若要篩選含有重組質粒的單菌落，還需要使用含有四環(huán)素的固體培養(yǎng)基。

（3）依題文可知，篩選轉化的愈傷組織即含有目的基因的愈傷組織，需要使用含除草劑的選擇培養(yǎng)基。結合題干信息可知，愈傷組織形成完整植株的途徑：器官發(fā)生途徑和胚狀體發(fā)生途徑。具體通過哪一條途徑主要取決于培養(yǎng)基成分中激素的種類及其濃度配比。

（4）根據(jù)基因工程的實施步驟可知，目的基因是否在再生植株中正確表達，應檢測再生植株中該基因的表達產物是否出現(xiàn)。