Question

2009年10月，我國(guó)自主研發(fā)的轉(zhuǎn)基因抗蟲水稻“華恢1號(hào)”獲得農(nóng)業(yè)部頒發(fā)的安全證書。下圖表示該抗蟲水稻主要培育流程，據(jù)圖回答：

（1）④過程應(yīng)用的主要生物技術(shù)是                    。
（2）殺蟲基因（crylA）是人們根據(jù)幾種Bt毒蛋白的分子結(jié)構(gòu)，設(shè)計(jì)并人工合成的，這屬于                    工程技術(shù)范疇。
（3）組建理想的載體需要對(duì)天然的質(zhì)粒進(jìn)行改造。下圖是天然土壤農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒結(jié)構(gòu)示意圖（示部分基因及部分限制性內(nèi)切酶作用位點(diǎn)），據(jù)圖分析：

①人工改造時(shí)，要使抗蟲基因表達(dá)，還應(yīng)插入                            。
②人工改造時(shí)用限制酶Ⅱ處理，其目的是：第一，去除質(zhì)粒上的         和         （基因），保證T-DNA進(jìn)入水稻細(xì)胞后不會(huì)引起細(xì)胞的無限分裂和生長(zhǎng)；第二，使質(zhì)粒帶有單一限制酶作用位點(diǎn)，有利于                                       。第三，使質(zhì)粒大小合適，可以提高轉(zhuǎn)化效率等。
③若用限制酶Ⅰ分別切割改造過的理想質(zhì)粒和帶有抗蟲基因的DNA分子，并構(gòu)成重組Ti質(zhì)粒。分別以含四環(huán)素和卡那霉素的培養(yǎng)基培養(yǎng)已成功導(dǎo)入抗蟲基因的水稻胚細(xì)胞，觀察到的細(xì)胞生長(zhǎng)的現(xiàn)象是                                                       。
（4）若限制酶Ⅱ切割DNA分子后形成的粘性末端為，則該酶識(shí)別的核苷酸序列是                               。

Answer 1

（1）植物組織培養(yǎng)
（2）蛋白質(zhì)
（3）①啟動(dòng)子
②tms和tmr（2分） 目的基因（或外源DNA）準(zhǔn)確插入
③在含卡那霉素的培養(yǎng)基能夠生長(zhǎng)，而在含四環(huán)素的培養(yǎng)基中不能生長(zhǎng)2分
（4）GACGTC

解析試題分析：如圖導(dǎo)入目的基因的受體細(xì)胞培養(yǎng)成植株需要用到植物組織培養(yǎng)技術(shù)。生產(chǎn)出自然界沒有的蛋白質(zhì)屬于蛋白質(zhì)工程，基因表達(dá)載體一般由目的基因，標(biāo)記基因，啟動(dòng)子、終止子等部分組成。如圖tms和tmr是控制生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的基因所以應(yīng)去除。為了目的基因的準(zhǔn)確插入應(yīng)使質(zhì)粒帶有單一限制酶作用位點(diǎn)。改造后的質(zhì)粒沒有抗四環(huán)素的標(biāo)記基因所以以含四環(huán)素和卡那霉素的培養(yǎng)基培養(yǎng)后，在含卡那霉素的培養(yǎng)基能夠生長(zhǎng)，而在含四環(huán)素的培養(yǎng)基中不能生長(zhǎng)。根據(jù)黏性末端的堿基可推測(cè)該酶識(shí)別的核苷酸序列為GACGTC。
考點(diǎn)：基因工程
點(diǎn)評(píng)：本題考查了學(xué)生的識(shí)圖分析能力，難度適中，解題的關(guān)鍵是明確基因工程的過程。