Question

【題目】請(qǐng)分析回答與微生物有關(guān)的問題：

（1）微生物接種方法很多，最常用的是平板劃線法和_________。平板劃線時(shí)，接種環(huán)通過________滅菌，在第二次及以后的操作時(shí)，總是從上一次的末端開始，這一樣做的目的是_________________。

（2）要從土壤中分離純化產(chǎn)脂肪酶細(xì)菌時(shí)，常常需要進(jìn)行選擇培養(yǎng)，目的是__________，然后再接種并培養(yǎng)，接種時(shí)挑取了菌液在3塊相同平板上劃線，結(jié)果其中1塊平板的各劃線區(qū)均未見菌落生長(zhǎng)，最可能的原因是_________________。

（3）為了統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目，在細(xì)菌培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋倍數(shù)為105的土壤樣品液0.1 ml，培養(yǎng)一段時(shí)間后，平板上長(zhǎng)出的細(xì)菌菌落數(shù)分別為13、156、462、178和191，則每克士壤樣品中的細(xì)菌數(shù)量___________個(gè)。對(duì)菌落數(shù)目進(jìn)行統(tǒng)計(jì)時(shí)，應(yīng)選取菌落數(shù)日穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，這樣做的原因是_______________________________。

（4）為長(zhǎng)期保存純化的優(yōu)質(zhì)菌種，可以采用__________________的方法。

Answer 1

【答案】稀釋涂布平板法 灼燒 將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌落 增大產(chǎn)脂肪酶細(xì)菌的濃度 接種環(huán)溫度過高，產(chǎn)脂肪酶細(xì)菌被殺死 1.75×108 防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致遺漏菌落數(shù)目 甘油管藏

【解析】

單菌落分離法包含劃線分離法和稀釋涂布平板法，常用于分離獲得單菌落。劃線分離法是用接種環(huán)以無菌操作沾取少許待分離的材料，在無菌平板表面進(jìn)行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續(xù)劃線，微生物細(xì)胞數(shù)量將隨著劃線次數(shù)的增加而減少，并逐步分散開來。稀釋平板計(jì)數(shù)是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的單個(gè)菌落，即是由一個(gè)單細(xì)胞繁殖而成這一培養(yǎng)特征設(shè)計(jì)的計(jì)數(shù)方法，即一個(gè)菌落代表一個(gè)單細(xì)胞。計(jì)數(shù)時(shí)，首先將待測(cè)樣品制成均勻的系列稀釋液，盡量使樣品中的微生物細(xì)胞分散開，使成單個(gè)細(xì)胞存在（否則一個(gè)菌落就不只是代表一個(gè)細(xì)胞），再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布于平板中的培養(yǎng)基內(nèi)。經(jīng)培養(yǎng)后，由單個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖形成菌落，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目，即可計(jì)算出樣品中的含菌數(shù)。此法所計(jì)算的菌數(shù)是培養(yǎng)基上長(zhǎng)出來的菌落數(shù)，故又稱活菌計(jì)數(shù)。

（1）平板劃線法和稀釋涂布平板法是兩種微生物接種最常用的方法。平板劃線時(shí)，將接種環(huán)在酒精燈火焰上灼燒，進(jìn)行灼燒滅菌。在第二次及以后的操作時(shí)，總是從上一次的末端開始，菌體密度越來越小，這樣可以將聚集的菌體逐步稀釋，可以獲得單菌落。

（2）要從土壤中分離純化產(chǎn)脂肪酶細(xì)菌時(shí)，常常需要進(jìn)行選擇培養(yǎng)，把其它雜菌淘汰掉，增大脂肪酶細(xì)菌的濃度。3塊相同平板上劃線，只有1塊平板的各劃線區(qū)均未見菌落生長(zhǎng)，說明原菌種及培養(yǎng)基都沒問題，最可能的原因是接種環(huán)溫度過高，產(chǎn)脂肪酶細(xì)菌被殺死。

（3）平板上長(zhǎng)出的細(xì)菌菌落數(shù)只有三個(gè)（156、178、191）是符合要求的，則每克士壤樣品中的細(xì)菌數(shù)量為（156+178+191）÷3÷0.1×105=1.75×108個(gè)。菌落形成需要時(shí)間，因此對(duì)菌落數(shù)目進(jìn)行統(tǒng)計(jì)時(shí)，應(yīng)選取菌落數(shù)日穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，這樣做可防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致遺漏菌落數(shù)目。

（4）甘油管冷凍保藏法是利用微生物在甘油中生長(zhǎng)和代謝受到抑制的原理達(dá)到保藏目的。長(zhǎng)期保存純化的優(yōu)質(zhì)菌種，可以采用甘油管藏的方法。