Question

【題目】科學(xué)家利用生物工程技術(shù)，探究豬骨形態(tài)發(fā)生蛋白15(bmP15)基因具有表達(dá)特異性和示蹤干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為類卵母細(xì)胞的潛能。通過(guò)擴(kuò)增豬bmP15基因的啟動(dòng)子片段與增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（EGFP)基因構(gòu)建表達(dá)載體，該工程技術(shù)基本流程如下圖。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）利用___________技術(shù)擴(kuò)增bmP15基因的啟動(dòng)子片段的前提，是要有一段已知核苷酸序列，以便合成__________。

（2）過(guò)程①中，應(yīng)先用限制酶________________處理表達(dá)載體1,以便插入bmP15基因的啟動(dòng)子構(gòu)建表達(dá)載體2。

（3）過(guò)程②中，常采用___________技術(shù)將表達(dá)載體2成功導(dǎo)入受體細(xì)胞。

（4）培養(yǎng)受體細(xì)胞時(shí)，通常需在培養(yǎng)液中添加一定量的___________，以防污染；還需通入一定濃度的C02,目的是_________________。

（5）在實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，利用標(biāo)記的_______基因作探針，與豬羊水干細(xì)胞的mRNA進(jìn)行分子雜交，可進(jìn)一步探究豬bmp基因特異性表達(dá)的原因。

（6）實(shí)驗(yàn)說(shuō)明，bmP15基因啟動(dòng)子調(diào)控下EGFP基因在____________細(xì)胞表達(dá)。

Answer 1

【答案】 PCR 引物 XhoⅠ和HindⅢ(缺一不給分） 顯微注射 抗生素 維持培養(yǎng)液的pH EGFP 豬卵巢細(xì)胞和中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢（缺一不給分）

【解析】試題分析：本題考查基因工程，考查對(duì)基因工程的工具和操作流程的理解和識(shí)記。

（1）擴(kuò)增bmP15基因的啟動(dòng)子片段，需要利用PCR技術(shù)，該技術(shù)的前提是要有一段已知核苷酸序列，以便合成引物。

（2）過(guò)程①中，應(yīng)先用限制酶XhoⅠ和HindⅢ處理表達(dá)載體1和bmP15基因，以獲取、插入bmP15基因的啟動(dòng)子構(gòu)建表達(dá)載體2。

（3）常采用顯微注射技術(shù)將表達(dá)載體2成功導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞。

（4）培養(yǎng)受體細(xì)胞時(shí)，通常需在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素，以防污染；還需通入一定濃度的C02，以維持培養(yǎng)液的pH。

（5）探究豬bmp基因特異性表達(dá)的原因，可利用標(biāo)記的EGFP基因作探針，與豬羊水干細(xì)胞的mRNA進(jìn)行分子雜交，檢測(cè)EGFP基因是否轉(zhuǎn)錄。

（6）實(shí)驗(yàn)說(shuō)明，在bmP15基因啟動(dòng)子調(diào)控下EGFP基因在豬卵巢細(xì)胞和中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞表達(dá)。