Question

【題目】乳頭瘤病毒HPV可導(dǎo)致人患宮頸癌，科研人員將HPV某外殼蛋白A基因構(gòu)建成表達(dá)載體，經(jīng)包裝或直接注入體內(nèi)，表達(dá)出相應(yīng)抗原，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)。該方法獲得的疫苗稱為DNA疫苗。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）獲取A基因的方法：

①方法一：提取HPV的DNA，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增A基因時(shí)，至少經(jīng)過(guò)_______次循環(huán)才能獲得該基因，此過(guò)程中利用的原料是____________________。

②方法二：從宿主細(xì)胞中提取總RNA，以與__________________互補(bǔ)的一段單鏈DNA作為引物，加入____________酶獲得cDNA，然后經(jīng)PCR擴(kuò)增獲得大量的A基因。

（2）構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，常用不同的限制酶切割質(zhì)粒與目的基因，其具備的優(yōu)勢(shì)是________________________。

（3）DNA疫苗是預(yù)防性生物制品，與傳統(tǒng)疫苗相比其具備的優(yōu)點(diǎn)有__________________（至少一點(diǎn)），而單克隆抗體作為治療性生物制品，具備的優(yōu)點(diǎn)是_______________________，制備單克隆抗體需要以_________________技術(shù)為基礎(chǔ)。

Answer 1

【答案】3 四種游離的脫氧核苷酸（dNTP） A基因的mRNA（A基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA） 逆轉(zhuǎn)錄（反轉(zhuǎn)錄） 避免目的基因和質(zhì)粒的自身環(huán)化和隨意連接 DNA疫苗作用時(shí)間長(zhǎng)、DNA疫苗更安全、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、更容易保存 特異性強(qiáng)、靈敏度高、可大量制備 動(dòng)物 細(xì)胞培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞融合

【解析】

該題主要考察了基因工程的相關(guān)知識(shí)。獲取目的基因的方法一般有從基因文庫(kù)中選擇、利用mRNA反轉(zhuǎn)錄合成、利用DNA合成儀用化學(xué)方法人工合成、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增。單克隆抗體常常以動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)為基礎(chǔ)。

（1）①方法一：根據(jù)PCR的特點(diǎn)，至少需要3次循環(huán)才能從DNA分子中獲得目的基因；PCR實(shí)質(zhì)是DNA體外復(fù)制過(guò)程，因此需要四種游離的脫氧核苷酸為原料；

②方法二：利用逆轉(zhuǎn)錄方法獲得目的基因，逆轉(zhuǎn)錄獲得目的基因需設(shè)計(jì)引物，該引物需要能與A基因的mRNA配對(duì)；通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄得到DNA單鏈，該過(guò)程需要逆轉(zhuǎn)錄酶的催化，然后在Taq聚合酶的作用下得到雙鏈DNA分子，然后繼續(xù)PCR擴(kuò)增得到大量的A基因；

（2）用不同限制酶切割目的基因和質(zhì)�？梢苑乐鼓康幕�因和質(zhì)粒的自身環(huán)化和隨意連接；

（3）DNA疫苗具有作用時(shí)間長(zhǎng)、更安全、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、更容易保存的特點(diǎn)；而單克隆抗體具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、可大量制備的特點(diǎn)；一般情況下制備單克隆抗體需以動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)為基礎(chǔ)。