Question

1．多環(huán)芳香烴（PAHs）是一類高毒性有機污染物，由于具有致癌物和致突變性而受到關注．實驗小組從土壤中分離出能降解PAHs的細菌，并對其進行培養(yǎng)和計數(shù)．請回答下列問題：
（1）實驗小組從富含PAHs的土壤中取樣后，放置在以PAHs為唯一碳源的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，其目的是增加PAHs分解菌的濃度，以確保能夠從樣品中分離出目的菌．
（2）將PAHs降解菌的菌液稀釋10⁵倍后取0.1mL分別涂布在3個平板中，經培養(yǎng)，3個平板上的菌落數(shù)分別是79個、57個和41個，則樣液中的活菌數(shù)是5.9×10⁷個/mL．也可以在顯微鏡下采用血細胞計數(shù)板直接計數(shù)的方法統(tǒng)計樣液中PAHs降解菌的數(shù)量．
（3）若采用平板劃線法分離樣液中的PAHs降解菌，操作時接種環(huán)通過灼燒滅菌．在涂布平板時，滴加到培養(yǎng)基表面的菌液不宜過多，其原因是菌液過多會出現(xiàn)積液，導致菌體堆積而不能獲得單個細菌形成的菌落．示意圖A和B中，圖B表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結果．

（4）若某一實驗組平板上菌落的平均數(shù)為201個，而空白對照組的1個平板上出現(xiàn)了3個菌落，該結果說明這次實驗可能出現(xiàn)了雜菌污染．

Answer 1

分析 1、無菌操作技術有消毒和滅菌，消毒有煮沸消毒法、巴氏消毒法和化學藥劑消毒法，滅菌有灼燒滅菌法適用于接種工具、干熱滅菌法適用于玻璃器皿和金屬工具、高壓蒸汽滅菌法適用于培養(yǎng)基及容器的滅菌．
2、接種最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法，平板劃線分離法：由接種環(huán)以菌操作沾取少許待分離的材料，在無菌平板表面進行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續(xù)劃線，微生物細胞數(shù)量將隨著劃線次數(shù)的增加而減少，并逐步分散開來，如果劃線適宜的話，微生物能一一分散，經培養(yǎng)后，可在平板表面得到單菌落．
稀釋平板計數(shù)是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的單個菌落，即是由一個單細胞繁殖而成這一培養(yǎng)特征設計的計數(shù)方法，即一個菌落代表一個單細胞．計數(shù)時，首先將待測樣品制成均勻的系列稀釋液，盡量使樣品中的微生物細胞分散開，使成單個細胞存在（否則一個菌落就不只是代表一個細胞），再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布于平板中的培養(yǎng)基內．

解答 解：（1）從土壤中分離出能降解PAHs的細菌需要使用選擇培養(yǎng)基，即需要使用以PAHs為唯一碳源的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，增加PAHs分解菌的濃度，以確保能夠從樣品中分離出目的菌．
（2）根據(jù)題意可知，樣液中的活菌數(shù)是（79+57+41）÷3÷0.1×10⁵=5.9×10⁷個/mL．計數(shù)還可以采用血小板計數(shù)板直接計數(shù)的方法統(tǒng)計樣液中PAHs降解菌的數(shù)量．
（3）實驗時，接種環(huán)需要采用灼燒滅菌的方法進行滅菌．在涂布平板時滴加到培養(yǎng)基表面的菌液過多會出現(xiàn)積液，導致菌體堆積而不能獲得單個細菌形成的菌落．
（4）據(jù)圖分析可知，A平板是平板劃線法得到，B平板中的菌落均勻，是稀釋涂布平板法得到的．空白培養(yǎng)的培養(yǎng)基上有菌落說明培養(yǎng)基被雜菌污染，所得到的數(shù)據(jù)沒有意義．
故答案為：
（1）增加PAHs分解菌的濃度，以確保能夠從樣品中分離出目的菌
（2）5.9×10⁷     血細胞計數(shù)板
（3）灼燒    菌液過多會出現(xiàn)積液，導致菌體堆積而不能獲得單個細菌形成的菌落    B    
（4）雜菌污染

點評 微生物這部分內容是高考試題的一個熱點一般體現(xiàn)在對微生物的篩選、培養(yǎng)和滅菌，考察的知識點有微生物的無菌操作、微生物的分離以及產品的提取，注意總結．