Question

7．(廣東高考)

(1)商品化植酸酶主要來自微生物。在產(chǎn)酶菌株篩選過程中，常在基本培養(yǎng)基中添加不溶于水的植酸鈣制成固體平板，植酸鈣被植酸酶分解后可在平板上產(chǎn)生____________，可根據(jù)其大小選擇目的菌株，所得菌株需要進(jìn)一步測定植酸酶活性。活性測定可以植酸鈉作為底物，活性可用一定條件下單位時間的____________表示。

(2)利用上述所得菌株制備植酸酶的流程如圖：

發(fā)酵液離心Ｋ菌體去除Ｋ含酶的

發(fā)酵液Ｋ透析Ｋ透析液(Ⅰ)去除Ｋ粗提物(Ⅱ)純化Ｋ純酶

�、裰械闹饕�成分為____________； Ⅱ中包含植酸酶等多種蛋白質(zhì)。請寫出一種純化得到植酸酶的方法及其依據(jù)。

(3)為構(gòu)建基因工程菌，可用PCR等技術(shù)從上述菌株中克隆植酸酶基因。PCR反應(yīng)包括多次循環(huán)，每次循環(huán)包括三步：____________。反應(yīng)過程中打開模板DNA雙鏈的方法是__________________________。

(4)除植酸酶外，微生物還能應(yīng)用在哪些酶的生產(chǎn)中？(至少寫兩種)

Answer 1

答案：(1)透明圈　植酸鈉的消耗量(減少量)或磷酸(肌醇)的生成量(產(chǎn)量)

(2)小分子雜質(zhì)　凝膠色譜法：根據(jù)蛋白質(zhì)之間的分子大小、吸附性質(zhì)等差異進(jìn)行純化。(或電泳法：根據(jù)蛋白質(zhì)之間的電荷、分子大小等差異進(jìn)行純化)

(3)變性、復(fù)性和延伸(長)　加熱(或高溫處理)

(4)蛋白酶、脂肪酶、纖維素酶

解析：當(dāng)植酸鈣被植酸酶分解以后，會在平板上出現(xiàn)透明圈。植酸酶活性高低可以用單位時間內(nèi)底物減少量來表示。(2)透析的目的是將酶與發(fā)酵液分開。分離不同種類的蛋白質(zhì)可以用凝膠色譜法，原理是根據(jù)相對分子質(zhì)量大小。(3)PCR技術(shù)包括三步：變性―→復(fù)性―→延伸，變性的原理是采用加熱處理。(4)微生物產(chǎn)生酶的種類很多。例如蛋白酶、脂肪酶等。