Question

【題目】20世紀(jì)以來(lái)，生物工程迅猛發(fā)展，人們應(yīng)用生物工程技術(shù)已獲得了多種需要的生物新品種或新產(chǎn)品。請(qǐng)據(jù)圖回答下列問(wèn)題：

（1）圖中（I）是______________，在構(gòu)建重組質(zhì)粒的過(guò)程中，保證（I）與質(zhì)粒具有相同黏性末端的是酶A、酶B中的_______________。

（2）在將（I）導(dǎo)入受體細(xì)胞之前需構(gòu)建基因表達(dá)載體（重組質(zhì)粒），其目的是使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)，使目的基因能夠______________。如果（II）受體細(xì)胞是大腸桿菌細(xì)胞，最常用的轉(zhuǎn)化方法是________________，原理是________________。

（3）（II）、（III）的過(guò)程中要對(duì)受體細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，目的是判斷目的基因是否可以穩(wěn)定維持和表達(dá)其遺傳性狀。若要檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA，可用_______________技術(shù)；若要檢測(cè)目的基因是否表達(dá)出蛋白質(zhì)，可用___________________技術(shù)。

（4）寫(xiě)出質(zhì)粒作為運(yùn)載體的條件_______________、__________________(兩項(xiàng)）。

Answer 1

【答案】 目的基因 酶A 表達(dá)和發(fā)揮作用 Ca離子轉(zhuǎn)化法 使其成為感受態(tài)細(xì)胞，容易吸收外源DNA 分子雜交 抗原—抗體雜交 一個(gè)至多個(gè)限制酶切位點(diǎn) 有標(biāo)記基因

【解析】試題分析：根據(jù)圖解流程分析可知，酶A為限制酶，識(shí)別并切割含目的基因的供體DNA以及質(zhì)粒，以獲得具有相同黏性末端的目的基因（I）和質(zhì)粒；酶B為DNA連接酶，將切出的目的基因與質(zhì)粒重新連接形成重組質(zhì)粒（II）；再將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞，得到含轉(zhuǎn)基因的細(xì)胞，最后經(jīng)過(guò)篩選，獲得能穩(wěn)定遺傳并表達(dá)的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞，經(jīng)體外培養(yǎng)提取所需的轉(zhuǎn)基因表達(dá)產(chǎn)物。

（1）根據(jù)前面的分析可知，圖中（I）是目的基因，在構(gòu)建重組質(zhì)粒的過(guò)程中，保證（I）與質(zhì)粒具有相同黏性末端的是酶A——限制酶。

（2）在將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞的關(guān)鍵是使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。如果（II）受體細(xì)胞是大腸桿菌細(xì)胞，最常用的轉(zhuǎn)化方法是鈣離子轉(zhuǎn)化法，其原理是利用鈣離子處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細(xì)胞，容易吸收外源DNA。

（3）對(duì)接受目的基因的受體細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，目的是判斷目的基因是否可以穩(wěn)定維持和表達(dá)其遺傳性狀。若要檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA，可用分子雜交技術(shù)；若要檢測(cè)目的基因是否表達(dá)出蛋白質(zhì)，可用抗原—抗體雜交技術(shù)。

（4）質(zhì)粒作為運(yùn)載體的條件：一是它含有一個(gè)至多個(gè)限制酶切位點(diǎn)；二是含有標(biāo)記基因；三是能在宿主細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定保持和復(fù)制；四是對(duì)宿主細(xì)胞沒(méi)有危害性。