Question

19．紅細(xì)胞含有大量血紅蛋白，血紅蛋白的主要功能是攜帶O₂和CO₂．我們可以選用豬、牛、羊或其他哺乳動(dòng)物的血液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，來(lái)提取和分離血紅蛋白．根據(jù)材料回答問(wèn)題：
（1）實(shí)驗(yàn)前取新鮮血液，要在采血器中預(yù)先加入檸檬酸鈉，目的是防止血液凝固．
（2）提取和分離血紅蛋白的程序是：樣品處理、粗分離、純化、純度鑒定．
①在樣品處理步驟中，洗滌紅細(xì)胞的目的是去除雜蛋白或（血漿蛋白），用磷酸緩沖液溶液洗滌，洗滌后離心分離的速度和時(shí)間要求是低速、短時(shí)間（如500r/min離心2min），離心后的上清液沒(méi)有黃色就說(shuō)明紅細(xì)胞已洗滌干凈．
②在粗分離步驟中，透析的目的是去除相對(duì)分子量較小的雜質(zhì)．
③純化步驟用凝膠色譜法，圖一操作中加樣的正確順序是④①②③，在執(zhí)行圖一中②所示操作時(shí)，色譜柱下端連接的尼龍管應(yīng)該關(guān)閉（填“打開(kāi)”或“關(guān)閉”）．圖二是利用樣品分離得到的結(jié)果，則圖二中蛋白質(zhì)分子量最小的是丙．
④純度鑒定步驟，利用瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)，將得到的蛋白質(zhì)進(jìn)行分離，在電泳過(guò)程中，影響蛋白質(zhì)遷移速度的因素包括蛋白質(zhì)分子的大小、帶電性質(zhì)以及分子的形狀等．而加入SDS后，使得蛋白質(zhì)的遷移率只取決于分子的大小．

Answer 1

分析 蛋白質(zhì)的提取和分離：
1、原理：凝膠色譜法是根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小來(lái)分離蛋白質(zhì)的有效方法，相對(duì)分子質(zhì)量小的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程長(zhǎng)，移動(dòng)的速度慢，相對(duì)分子質(zhì)量大的蛋白質(zhì)不容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程短，移動(dòng)的速度快，因此相對(duì)分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)得以分離．
2、血紅蛋白的提取與分離的實(shí)驗(yàn)步驟主要有：（1）樣品處理：①紅細(xì)胞的洗滌，②血紅蛋白的釋放，③分離血紅蛋白溶液．（2）粗分離：①分離血紅蛋白溶液，②透析．（3）純化：調(diào)節(jié)緩沖液面→加入蛋白質(zhì)樣品→調(diào)節(jié)緩沖液面→洗脫→收集分裝蛋白質(zhì)．（4）純度鑒定--SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳．

解答 解：（1）在采血器中加入檸檬酸鈉的目的是防止血液凝固．
（2）①在樣品處理步驟中，洗滌紅細(xì)胞的目的是去除雜蛋白或（血漿蛋白 ），用磷酸緩沖液洗滌，洗滌后進(jìn)行低速、短時(shí)間（如500r/min離心2min）離心，離心后的上清液沒(méi)有黃色就說(shuō)明紅細(xì)胞已洗滌干凈．
②透析的目的是去除相對(duì)分子量較小的雜質(zhì)．
③純化步驟：調(diào)節(jié)緩沖液面→加入蛋白質(zhì)樣品→調(diào)節(jié)緩沖液面→洗脫→收集分裝蛋白質(zhì)．圖一操作中，加樣的正確順序是④①②③，在執(zhí)行圖一中②所示操作時(shí)，色譜柱下端連接的尼龍管應(yīng)該關(guān)閉．凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)的原理是凝膠色譜法是根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小來(lái)分離蛋白質(zhì)的有效方法，相對(duì)分子質(zhì)量小的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程長(zhǎng)，移動(dòng)的速度慢，相對(duì)分子質(zhì)量大的蛋白質(zhì)不容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程短，移動(dòng)的速度快，因此相對(duì)分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)得以分離．因此圖二中蛋白質(zhì)分子量最小的是丙．
④電泳法是利用待測(cè)樣品中各種分子帶電性質(zhì)的差異和分子本身的大小、形狀不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離或鑒定．因此，在電泳過(guò)程中，影響蛋白質(zhì)遷移速度的因素包括蛋白質(zhì)分子的大小、帶電性質(zhì)以及分子的形狀等，而加入SDS后，使得蛋白質(zhì)的遷移率只取決于分子的大�。�
故答案為：
（1）防止血液凝固
（2）①去除雜蛋白或（血漿蛋白 ） 磷酸緩沖液   低速、短時(shí)間（如500r/min離心2min）  黃色  
②去除相對(duì)分子量較小的雜質(zhì)
③④①②③關(guān)閉　丙     
④大小　帶電性質(zhì)　分子的大小

點(diǎn)評(píng) 本題考查蛋白質(zhì)的提取和分離，對(duì)于此類(lèi)試題，需要考生注意的細(xì)節(jié)較多，如實(shí)驗(yàn)的原理、實(shí)驗(yàn)步驟、實(shí)驗(yàn)采用的試劑及試劑的作用等，需要考生在平時(shí)的學(xué)習(xí)過(guò)程中注意積累．