Question

【題目】利用單克隆抗體特異的作用于埃博拉病毒侵染蛋白（VP40蛋白）是一種戰(zhàn)勝埃博拉病毒的有效途徑。請據圖回答：

（1）過程①中選用兩種限制酶切割，使目的基因的兩端產生不同的黏性末端，這樣處理的目的是___________。

（2）圖中過程②常用___________方法導入大腸桿菌。用大腸桿菌作為受體細胞的優(yōu)點是_____________________（答兩點即可）。

（3）在基因表達載體中，VP40蛋白基因必須插到___________，從而保證③順利完成。

（4）為檢測VP40基因是否成功表達，可以采用___________技術。

（5）④過程常用方法是___________。在大量生產單克隆抗體前，需要對雜交瘤細胞進行克隆化培養(yǎng)和___________以獲得符合生產需求的雜交瘤細胞。用該方法生產的VP40蛋白質抗體具有___________________________________特點。

Answer 1

【答案】防止目的基因與質粒錯誤連接（或防止目的基因環(huán)化；或保證目的基因正確地連接到質粒上） 感受態(tài)細胞法 繁殖快，易培養(yǎng) 啟動子和終止子之間 抗原-抗體雜交 滅活的病毒誘導 抗體檢測 特異性強，靈敏度高，可大量制備

【解析】

1、在制備過程中需要將抗原首先注入生物體內，是其產生具有免疫能力的B淋巴細胞，再用動物細胞融合技術將B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合，并篩選出能大量增殖和產生特異性抗體的雜交瘤細胞，最后經過體外或體內培養(yǎng)，獲取單克隆抗體。

2、動物細胞融合通過物理方法如離心、振動和電刺激，化學方法如聚乙二醇和生物方法如滅活的仙臺病毒的誘導融合，形成雜種細胞，體現了細胞膜的結構特點具有一定的流動性。

圖示①重組質粒的構建，②重組質粒導入大腸桿菌內，③產生特異性抗體，④動物細胞融合。

（1）過程①中選用兩種限制酶切割，可以使目的基因的兩端產生不同的黏性末端，避免目的基因環(huán)化，保證目的基因按一定方向插入到質粒中。

（2）圖中過程②用感受態(tài)細胞法即Ca2+處理大腸桿菌，可以增大細胞壁的通透性，使大腸桿菌易于吸收質粒（外源DNA）（或處于感受態(tài)），提高轉化效率。大腸桿菌是細菌，具有繁殖快，易培養(yǎng)等優(yōu)點，故用大腸桿菌作為受體細胞。

（3）VP40蛋白基因必須插到啟動子和終止子之間，因為基因表達載體中，VP40蛋白基因的首端必須含有啟動子，啟動子是RNA聚合酶結合位點，可以啟動VP40蛋白基因的轉錄，同時終止子是轉錄結束的信號。

（4）檢測VP40基因是否成功表達，即檢測VP40基因是否控制合成VP40蛋白，可以用VP40蛋白抗體進行抗原—抗體檢測。

（5）單克隆抗體制備流程:先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應，之后從小鼠脾臟中獲取已經免疫的B淋巴細胞；通過滅活的病毒誘導B細胞和骨髓瘤細胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞；進行抗體檢測，篩選出能產生特定抗體的雜交瘤細胞；進行克隆化培養(yǎng)。單克隆抗體技術產生的抗體具有特異性強，靈敏度高，可大量制備等特點。