Question

【題目】圖1表示含有目的基因D的DNA片段和部分堿基序列，圖2表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列．現(xiàn)有MspⅠ、

BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4種限制性核酸內(nèi)切酶切割的堿基序列和酶切位點，分別為C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG．請回答下列問題：

（1）圖1的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個脫氧核苷酸之間由 （填化學(xué)鍵名稱）連接．

（2）若用限制酶SmaⅠ完全切割圖1中DNA片段，產(chǎn)生的末端是 末端，其產(chǎn)物長度為 ．

（3）若圖1中虛線方框內(nèi)的堿基對被T﹣A堿基對替換，那么基因D就突變?yōu)榛�因d．從雜合子分離出圖1及其對應(yīng)的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，產(chǎn)物中共有 種不同的DNA片段．

（4）若將圖2中質(zhì)粒和目的基因D通過同種限制酶處理后進行連接，形成重組質(zhì)粒，那么應(yīng)選用的限制酶是 ．在導(dǎo)入重組質(zhì)粒后，為了篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌，一般需要用添加了 的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)．經(jīng)檢測，部分含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中目的基因D不能正確表達(dá)，其最可能的原因是 ．

Answer 1

【答案】（1）磷酸二酯鍵

（2）平 537bp、790bp、661bp

（3）4

（4）BamH I 抗生素B 同種限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D與質(zhì)粒反向連接

【解析】

試題分析：（1）一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個脫氧核苷酸之間由磷酸二酯鍵連接．

（2）SmaⅠ識別的序列為GGGCCC，切割會產(chǎn)生平末端；圖1中DNA片段含有兩個SmaⅠ識別位點，第一個識別位點在左端534 bp序列向右三個堿基對的位置；第二個識別位點在右端658bp序列向左三個堿基的位置，從而兩個位點切割后產(chǎn)生的DNA片段的長度分布為534+3，796﹣3﹣3，658+3，即得到的DNA片段長度為537、790、661．

（3）在雜合子體內(nèi)含有基因D和基因d，基因D的序列中含有兩個識別位點，經(jīng)過SmaI完全切割會產(chǎn)生537bp、790bp和661bp三種不同長度的片段，基因d的序列中含有一個識別位點，經(jīng)過切割后會產(chǎn)生1327bp和661bp兩種長度的片段，綜上，雜合子中分離到該基因的DNA片段經(jīng)過切割后會產(chǎn)生4種不同長度的片段．

（4）能夠獲取目的基因并切開質(zhì)粒的限制酶有識別序列為GGATCC的BamH I和識別序列為GATC的MboI，若使用Mbo I會同時破壞質(zhì)粒中的抗生素A抗性基因和抗生素B抗性基因，所以要用BamH I來切割目的基因和質(zhì)粒，切割后保留了完整的抗生素B抗性基因，便于篩選出含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌．因為目的基因和運載體是用同種限制酶切割的，目的基因兩端的末端和質(zhì)粒切割后的兩個末端都能進行互補，可能出現(xiàn)目的基因反向連接在運載體上的情況，導(dǎo)致基因D不能正確表達(dá)．

故答案為：（1）磷酸二酯鍵

（2）平 537bp、790bp、661bp

（3）4

（4）BamH I 抗生素B 同種限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D與質(zhì)粒反向連接