Question

4．復(fù)合型免疫缺陷癥（SCID）患者缺失ada基囚．利用基因療法將人正常ada基因轉(zhuǎn)入患者自身T細(xì)胞．可改善患者的免疫功能．如圖顯示該基因療法的兩個(gè)關(guān)鍵步驟．回答下列問題：
（1）圖中所示獲取正常ada基因的方法是從基因文庫中獲取目的基因，若要大量獲取該基因，可通過PCR技術(shù)迸行擴(kuò)增．與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制過程相比，PCR技術(shù)的不同點(diǎn)有不需要解旋酶、需要熱穩(wěn)定DNA聚合酶（答出兩點(diǎn)）
（2）步驟②是構(gòu)建基因表達(dá)載體．在該步驟中，病毒作為運(yùn)載體起作用，需使用的工具酶有限制酶和DNA連接酶．
（3）完成步驟②后，在體外將人正常ada基因?qū)�入患者自身的T細(xì)胞．此后，在將該T細(xì)胞重新輸入患者體內(nèi)之前，還必須完成哪兩項(xiàng)操作？將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞、目的基因的鑒定與檢測(cè)．

Answer 1

分析 1、基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．
2、分析題圖：圖示顯示基因療法的兩個(gè)關(guān)鍵步驟，其中①表示獲取目的基因，②表示構(gòu)建基因表達(dá)載體．

解答 解：（1）圖中所示獲取目的基因的方法是從基因文庫中獲取目的基因；與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制過程相比，PCR技術(shù)的不同點(diǎn)有：不需要解旋酶、需要熱穩(wěn)定DNA聚合酶．
（2）步驟②是構(gòu)建基因表達(dá)載體．在該步驟中，病毒作為運(yùn)載體起作用；構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，首先需要限制酶切割運(yùn)載體和含有目的基因的外源DNA分子，其次需要DNA連接酶將目的基因與運(yùn)載體連接形成重組DNA分子．
（3）基因工程的基本操作步驟主要包括四步：①目的基因的獲取；②基因表達(dá)載體的構(gòu)建；③將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞；④目的基因的檢測(cè)與表達(dá)．因此完成步驟②后，在體外將人正常ada基因?qū)�入患者自身的T細(xì)胞．此后，在將該T細(xì)胞重新輸入患者體內(nèi)之前，還必須完成的兩項(xiàng)操作為：將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞、目的基因的鑒定與檢測(cè)．
故答案為：
（1）從基因文庫中獲取目的基因         不需要解旋酶、需要熱穩(wěn)定DNA聚合酶
（2）構(gòu)建基因表達(dá)載體       運(yùn)載體      限制酶和DNA連接酶
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞、目的基因的鑒定與檢測(cè)

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合圖解，考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理、概念、操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)．