Question

【題目】某研究小組欲對比人手上不同部位微生物的分布情況。實驗步驟如下：

①準備工作：配置培養(yǎng)基（成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、．X、H2O） ，制作無菌平板。

②采樣：分別用蘸有無菌生理鹽水的棉拭子涂擦被檢對象手的手掌、手指、手背3個部位，擦完后，將手接觸部分剪去，將棉拭子放入裝有10毫升無菌生理鹽水的試管內送檢。

③檢測：將上述樣液充分振搖，將無菌吸管分別吸取1ml待檢樣液接種于無菌平板；將各組平板置于37℃恒溫箱中培養(yǎng)一段時間，統(tǒng)計各組平板上菌落的平均數(shù)。

回答下列問題：

（1）該培養(yǎng)基中微生物所需的碳源是_________。該培養(yǎng)基中的成分X通常是_________________。配制培養(yǎng)基的基本步驟是計算—稱量—溶化—__________—倒平板。

（2）若培養(yǎng)得到的菌落數(shù)目偏多，難以統(tǒng)計，應在第3步增加___________步驟。

（3）某同學在統(tǒng)計某一實驗組的3個平板菌落時，發(fā)現(xiàn)一個平板所得數(shù)據和另外兩個偏差較大，在做原始記錄時對該數(shù)據應___________（選填下列選項前的字母）。

A．舍棄 B．修改 C．如實填寫

為了檢驗該組相關數(shù)據的可靠性，還應_________________________。

（4）正是因為人手上有很多細菌，因此微生物的實驗室培養(yǎng)過程中，通常用75%的酒精對手進行消毒，而不用95%的酒精，其原因是___________________________。

Answer 1

【答案】牛肉膏、蛋白胨 瓊脂 滅菌 梯度稀釋 C 重復實驗 酒精能使蛋白質變性，但95%酒精濃度過高，會使細菌周圍形成一層由凝固蛋白質組成的保護膜，使酒精分子不能進入細菌，達不到殺死細菌的作用

【解析】

統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法：

（1）顯微鏡直接計數(shù)法

①原理：利用特定細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物數(shù)量；②方法：用計數(shù)板計數(shù)；③缺點：不能區(qū)分死菌與活菌。

（2）間接計數(shù)法（活菌計數(shù)法）

①原理：當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活

②操作

a、設置重復組，增強實驗的說服力與準確性。

b、為了保證結果準確，一般選擇菌落數(shù)在30~300的平板進行計數(shù)。

③計算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=（c÷V）×M，其中c代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（mL），M代表稀釋倍數(shù)。

（1）牛肉膏和蛋白胨都含有蛋白質的水解產物，即可以作為氮源，也可以作為碳源。平板為固體培養(yǎng)基，故需要加入瓊脂，即培養(yǎng)基的成分X為瓊脂。配置好培養(yǎng)基后，需將培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進行滅菌，再倒平板，即配制培養(yǎng)基的基本步驟是計算—稱量—溶化—滅菌—倒平板

（2）若培養(yǎng)得到的菌落數(shù)目偏多，難以統(tǒng)計，應在第3步增加梯度稀釋步驟。

（3）發(fā)現(xiàn)一個平板所得數(shù)據和另外兩個偏差較大，在做原始記錄時也應對該數(shù)據如實填寫，C正確，故選C。為了保證實驗可靠，需要重復實驗（或設置多個平行實驗）。

（4）通常用75%的酒精對手進行消毒，而不用95%的酒精，其原因是酒精能使蛋白質變性，但95%酒精濃度過高，會使細菌周圍形成一層由凝固蛋白質組成的保護膜，使酒精分子不能進入細菌，達不到殺死細菌的作用。