Question

16．埃博拉病毒（EBO）中EBOV是一種烈性的、泛嗜性的病毒，它首先破壞吞噬細胞，其次是肝、脾等細胞，進而導(dǎo)致血管通透性增加，出現(xiàn)嚴重的出血熱現(xiàn)象．目前尚無針對該病毒的特效藥或疫苗．
（1）EBOV感染者的血清中很難形成高濃度抗體，這是因為病毒最先侵染并破壞巨噬細胞，影響抗原呈遞，阻斷了體液免疫的發(fā)生．
（2）較難制作EBO疫苗的原因與其遺傳物質(zhì)的種類以及表達方式有關(guān)．EBO病毒容易變異，這是因為RNA是單鏈結(jié)構(gòu)，穩(wěn)定性較差．
（3）如圖1示利用“細胞技術(shù)”研制抗擊EBO的藥物與疫苗：

過程①獲得的甲細胞是B淋巴細胞或漿細胞細胞；圖中所用瘤細胞的作用是能大量增殖，產(chǎn)生足夠數(shù)量的特定抗體．要獲得純凈的單一品種抗體，上述操作的要點是一個淋巴細胞和一個瘤細胞結(jié)合．
（4）還可以利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)生產(chǎn)EBO蛋白疫苗．EBO結(jié)構(gòu)和基因組如圖2所示．EBO衣殼外的包膜上有5種蛋白棘突（包括GP蛋白和VP系列蛋白），其中GP蛋白最為關(guān)鍵，能被宿主細胞強烈識別．該技術(shù)的目的基因是GP蛋白基因

（5）腺病毒（基因E與復(fù)制、轉(zhuǎn)錄有關(guān)；基因L是腺病毒衣殼基因）具有弱致病性，但病毒在人體細胞內(nèi)增殖會導(dǎo)致正細胞裂解、死亡．因此，需要對腺病毒進行改造．如圖3所示腺病毒基因組、轉(zhuǎn)基因技術(shù)生產(chǎn)EBO蛋白疫苗與重組病毒粒子疫苗的基本過以EBO病毒包膜蛋白作為疫苗比較安全的原因是蛋白質(zhì)不能侵染細胞，不破壞細胞結(jié)構(gòu)．生產(chǎn)含目的基因重組病毒粒子作為目的基因的運載體，優(yōu)點是能侵染細胞運載目的基因；為保障安全，基因重組病毒粒子需要除去自身原本的一些基因，改用輔助質(zhì)粒攜帶這些基因．則除去的基因主要是復(fù)制基因E和衣殼蛋白兩類基因．
（6）輔助質(zhì)粒攜帶EBO病毒上的這些基因，與EBO攜帶一樣，均能在真核細胞中表達，說明單個基因的表達與其所在載體無關(guān)．

Answer 1

分析 分析圖1：圖1表示單克隆抗體的制備過程，其中①表示獲取漿細胞的過程；②表示細胞融合過程；③表示利用雜交瘤細胞生產(chǎn)單克隆抗體．
分析圖2：EBO衣殼外有包膜，包膜上有5種蛋白棘突，其中GP蛋白最為關(guān)鍵，能被宿主細胞強烈識別．右圖是EBO基因組；
分析圖3：左圖是腺病毒基因組，其中基因E與復(fù)制、轉(zhuǎn)錄有關(guān)；基因L是腺病毒衣殼基因．右圖表示轉(zhuǎn)基因技術(shù)生產(chǎn)EBO蛋白疫苗與重組病毒粒子疫苗的基本過程．

解答 解：（1）根據(jù)題干信息“首先破壞吞噬細胞”可知，EBOV感染者的血清中很難形成高濃度的抗體的原因是病毒最先侵染并破壞巨噬細胞，影響抗原呈遞，阻斷了體液免疫的發(fā)生．
（2）EBO病毒的遺傳物質(zhì)是RNA，而RNA是單鏈結(jié)構(gòu)，穩(wěn)定性較差，容易變異，因此較難制作EBO疫苗．
（3）圖1表示單克隆抗體的制備過程，其中過程①表示給小鼠注射特定抗原，進而獲得相應(yīng)的B淋巴細胞或漿細胞，即圖中甲細胞；過程②是將漿細胞和骨髓瘤細胞融合的過程；漿細胞能產(chǎn)生抗體，但在體外培養(yǎng)條件下不能無限增殖，因此所用瘤細胞的作用是能不斷分裂，提高抗體的產(chǎn)量．要獲得純凈的單一品種抗體，上述操作的要點是一個淋巴細胞與一個腫瘤細胞結(jié)合．
（4）根據(jù)題干信息“GP蛋白最為關(guān)鍵，能被宿主細胞強烈識別”可知，該技術(shù)的目的基因是G蛋白基因．
（5）以EBO病毒包膜蛋白作為疫苗比較安全，原因是蛋白質(zhì)不具侵染性，不會破壞細胞結(jié)構(gòu)；但蛋白質(zhì)不能復(fù)制，因此疫苗量較少，引起的免疫反應(yīng)效果較弱．生產(chǎn)含目的基因重組病毒粒子作為目的基因的運載體，其優(yōu)點是能通過主動侵染細胞運載目的基因；根據(jù)題干信息“基因E與復(fù)制、轉(zhuǎn)錄有關(guān)；基因L是腺病毒衣殼基因”可知，為保障安全，基因重組病毒粒子需要除去復(fù)制基因E和衣殼蛋白兩類基因．
（6）輔助質(zhì)粒攜帶EBO病毒上的這些基因，與EBO攜帶一樣，均能在真核細胞中表達，說明單個基因的表達與其所在載體無關(guān)．
圖6中neo是新霉素抗性基因，amp表示氨芐青霉素抗性基因，ori是質(zhì)粒的復(fù)制子，限制酶BamHⅠ、HindⅢ、PstⅠ、BglⅡ作用位點如下圖7．
故答案為：
（1）病毒最先侵染并破壞巨噬細胞，影響抗原呈遞，阻斷了體液免疫的發(fā)生   
（2）RNA是單鏈結(jié)構(gòu)，穩(wěn)定性較差   
（3）B淋巴細胞或漿細胞     能大量增殖，產(chǎn)生足夠數(shù)量的特定抗體   一個淋巴細胞和一個瘤細胞結(jié)合   
（4）GP蛋白基因    
（5）蛋白質(zhì)不能侵染細胞，不破壞細胞結(jié)構(gòu)   能侵染細胞運載目的基因   復(fù)制基因E和衣殼蛋白   
（6）單個基因的表達與其所在載體無關(guān)

點評 本題結(jié)合圖解，考查基因工程和細胞工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理、操作工具、操作步驟，掌握各步驟的相關(guān)細節(jié)；識記單克隆抗體的制備過程，能結(jié)合圖中和題中信息準確答題，綜合性較強，有一定難度．