Question

【題目】人血清白蛋白（HSA）具有重要的醫(yī)用價值，只能從血漿中制備。如圖是以基因工程技術(shù)獲取重組HSA（rHSA）的兩條途徑。

（1）獲取HSA基因，首先需采集人的血液，提取________________合成總cDNA，然后以DNA為模板，采用PCR技術(shù)擴(kuò)增HSA基因。如圖中箭頭表示一條引物結(jié)合模板的位置及擴(kuò)增方向，請用箭頭在方框內(nèi)標(biāo)出標(biāo)出另一條引物的位置及擴(kuò)增方向。

（2）啟動子通常具有物種及組織特異性，構(gòu)建在水稻胚乳細(xì)胞內(nèi)特異表達(dá)rHSA的載體，需要選擇的啟動子是________________（填寫字母，單選）。啟動子的作用是________________。

A.人血細(xì)胞啟動子 B.水稻胚乳細(xì)胞啟動子 C.大腸桿菌啟動子D.農(nóng)桿菌啟動子

（3）利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化水稻受體細(xì)胞時常添加酚類物質(zhì)，其目的是________________。

（4）人體合成的初始多肽，需要經(jīng)過膜系統(tǒng)加工形成正確的空間結(jié)構(gòu)才有活性。在人體內(nèi)參與初始HSA多肽加工的細(xì)胞器有________________（至少寫出兩種）。與途徑II相比，選擇途徑獲取rHSA的優(yōu)勢________________。

（5）為證明rHSA具有醫(yī)用價值，須確認(rèn)rHSA與________________的生物學(xué)功能一致。

Answer 1

【答案】總RNA（或 mRNA） B 是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，能驅(qū)動（目的）基因轉(zhuǎn)錄出mRNA 吸引農(nóng)桿菌移向水稻受體細(xì)胞，有利于目的基因成功轉(zhuǎn)化 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、線粒體 水稻是真核生物，具有膜系統(tǒng)，能對初始rHSA多肽進(jìn)行高效加工 HSA

【解析】

1.目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。
2.基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。

3.將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。
4.目的基因的檢測與鑒定：(1)分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。(2)個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。據(jù)此答題。

（1）為獲取HSA基因，首先需采集人的血液，提取mRNA通過反轉(zhuǎn)錄法合成總cDNA，然后以cDNA為模板，采用PCR技術(shù)擴(kuò)增HSA基因。由于DNA兩條鏈?zhǔn)欠聪蚱叫械�，�?fù)制時也是方向相反，如圖中箭頭表示一條引物結(jié)合模板的位置及擴(kuò)增方向，則另一條引物位于另一條鏈的相反一端。如圖所示。

（2）啟動子是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，通常具有物種及組織特異性，構(gòu)建在水稻胚乳細(xì)胞內(nèi)特異表達(dá)rHSA的載體，需要選擇的啟動子是水稻胚乳細(xì)胞啟動子，即B正確。啟動子的作用是是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，能驅(qū)動（目的）基因轉(zhuǎn)錄出mRNA。

（3）利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化水稻受體細(xì)胞的過程中，需添加酚類物質(zhì)，其目的是吸引農(nóng)桿菌移向水稻受體細(xì)胞，有利于目的基因成功轉(zhuǎn)化。
（4）在人體內(nèi)參與初始HSA多肽加工的細(xì)胞器有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、線粒體（提供能量）。由于大腸桿菌為原核生物，無生物膜系統(tǒng)，而水稻為真核生物，具有生物膜系統(tǒng)，故在人體合成的初始HSA多肽，與途徑Ⅱ相比，選擇途徑I獲取rHSA的優(yōu)勢是，水稻是真核生物，具有膜系統(tǒng)，能對初始rHSA多肽進(jìn)行高效加工。
（5）為證明rHSA具有醫(yī)用價值，需對基因工程的產(chǎn)物進(jìn)行鑒定，即確認(rèn)rHSA與HSA的生物學(xué)功能一致。