Question

我國(guó)基因工程藥物的研制和生產(chǎn)發(fā)展迅猛，下圖是利用基因工程方法生產(chǎn)重組人生長(zhǎng)激素的示意圖。圖中質(zhì)粒表示基因工程中經(jīng)常選用的載體—pBR322質(zhì)粒，Amp^r表示青霉素抗性基因，Tet^r表示四環(huán)素抗性基因。根據(jù)下圖回答下列問題（限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ切割形成的末端均不相同）：

（1）過程②必需的酶是    ，過程④必需的酶是     。⑤過程中為提高成功率，常用            溶液處理大腸桿菌。

（2）如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ對(duì)質(zhì)粒pBR322進(jìn)行切割，用一種酶、兩種酶和三種酶分別切割時(shí)，則形成的DNA片段共      種，其中含有完整四環(huán)素抗性基因的DNA片段的比例是      。

（3）如果只用限制酶PstI切割目的基因和質(zhì)粒pBR322，完成過程④、⑤后，將三角瓶?jī)?nèi)的大腸桿菌（不含Amp^r、Tet^r抗性質(zhì)粒）先接種到甲培養(yǎng)基上，形成菌落后用無菌牙簽挑取甲上的單個(gè)菌落，分別接種到乙和丙兩個(gè)培養(yǎng)基的相同位置上，一段時(shí)間后，菌落的生長(zhǎng)狀況如圖所示。接種到甲培養(yǎng)基上的目的是篩選     的大腸桿菌，含有目的基因的大腸桿菌在乙、丙培養(yǎng)基上的存活狀態(tài)分別是      ，     。

 

Answer 1

【答案】

（1）(逆)反轉(zhuǎn)錄酶    DNA連接酶    CaCl2

（2）9      1/3

（3）含四環(huán)素抗性基因    在乙中不能存活     在丙中存活

【解析】

試題分析：（1）過程②為逆轉(zhuǎn)錄，需要逆轉(zhuǎn)錄酶；過程④質(zhì)粒和基因連接形成重組質(zhì)粒。需要DNA連接酶發(fā)揮作用；⑤過程為轉(zhuǎn)化，需要CaCl₂使大腸桿菌處于易于吸收外界DNA的感受態(tài)。（2）PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ分3種酶分別用1,2,3表示，一種酶酶切時(shí)，一共可以得到3種不同長(zhǎng)片段；兩種酶酶切時(shí)，可得到1-2，2-1，2-3,3-2,1-3,3-1六種片段；三種酶酶切，可得到1-2,2-3,3-1三種片段，與前面重復(fù)，因此一種可形成9種片段，其中含有完整四環(huán)素抗性的有3種，單獨(dú)用1酶切，單獨(dú)用2酶切，1和2同時(shí)酶切得到的片段，占總數(shù)的1/3。（3）在甲中能生長(zhǎng)的是具有四環(huán)素抗性的細(xì)菌，含有四環(huán)素抗性基因；目的基因插入氨芐青霉素基因后，破壞了該基因，使含有目的基因的大腸桿菌不能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，但四環(huán)素基因是完好的，因此，含有目的基因的大腸桿菌能在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。

考點(diǎn)：本題考查基因工程的操作等知識(shí)點(diǎn)，意在考查考生能理解所學(xué)知識(shí)的要點(diǎn)，把握知識(shí)間的內(nèi)在聯(lián)系，形成知識(shí)的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)。