Question

12．苯酚及其衍生物廣泛存在于工業(yè)廢水中，對環(huán)境有嚴重危害．小明同學準備依據圖1操作步驟，從處理廢水的活性污泥中分離篩選酚降解高效菌株．請回答下列問題：

（1）酚降解菌富集培養(yǎng)基含有蛋白胨、K₂HPO₄、MgSO₄、苯酚和水，其中可作為碳源的有蛋白胨、苯酚．
（2）將采集到的樣品接種培養(yǎng)，苯酚用量應隨轉接次數(shù)增加而逐漸增加．以達到富集酚降解菌的目的．若圖1平板中菌落過于密集，應進一步稀釋涂布，以便于菌落計數(shù)與分離．制備平板培養(yǎng)基時除了需要水、營養(yǎng)物質外，還必須添加凝固劑．
（3）圖2為連續(xù)劃線法示意圖，在圖中③ （填圖中序號）區(qū)域更易獲得單菌落．

（4）采用比色測定法（使用苯酚顯色劑）檢測降解后的廢水中苯酚殘留量．先制作系列濃度梯度并進行顯色反應，下表中1～5號比色管的苯酚濃度應分別為0、0.2、0.4、0.6、0.8．

管號	1	2	3	4	5	6
苯酚濃度（mg/L）						1

如果廢水為50mg/L 苯酚溶液，降解后約有21%的苯酚殘留，則需將殘留液稀釋③ （填序號：①5   ②10   ③20）倍后，再進行比色．

Answer 1

分析 1、微生物培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質以及氧氣的要求．對異養(yǎng)微生物來說，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作為營養(yǎng)要素成分時并不是起單一方面的作用．
2、微生物常見的接種的方法
①平板劃線法：將已經熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經培養(yǎng)后可形成單個菌落．

解答 解：（1）培養(yǎng)基成分中的有機物均可以提供碳源，即蛋白胨、苯酚據可以作為碳源．
（2）分析實驗可知，實驗目的是篩選酚降解菌，因此將采集到的樣品接種培養(yǎng)，苯酚用量應隨轉接次數(shù)增加而逐漸增加，以達到富集酚降解菌的目的．若圖1平板中菌落過于密集，應進一步稀釋涂布，以便于菌落計數(shù)與分離．平板培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基需要加入瓊脂作為凝固劑．
（3）圖2為平板劃線法，隨著劃線次數(shù)的增加，菌種進一步被稀釋，因此圖中③區(qū)域更易獲得單菌落．
（4）進行實驗時，首先需要設置濃度為0的苯酚作為空白對照組，并且6號試管苯酚濃度為1，由此可見，濃度梯度應該為0.2，即表中1～5號比色管的苯酚濃度應分別為0、0.2、0.4、0.6、0.8．如果廢水為50mg/L 苯酚溶液，降解后約有21%的苯酚殘留，即殘留液中苯酚濃度約為10mg/L，與以上6支試管中的濃度相比，需要將殘留液稀釋20倍后，再進行比色．
故答案為：
（1）蛋白胨、苯酚
（2）增加    稀釋涂布    凝固劑
（3）③
（4）0、0.2、0.4、0.6、0.8    ③

點評 本題考查了微生物的分離與培養(yǎng)的有關知識，要求考生能夠識記培養(yǎng)基的成分以及配制方法，掌握微生物分離與純化的兩種方法，能夠結合表格數(shù)據對實驗進行完善，屬于考綱中識記、理解層次的考查．