Question

【題目】Graves�。�GD）可導(dǎo)致甲狀腺功能亢進(jìn)。研究發(fā)現(xiàn)，GD患者甲狀腺細(xì)胞表面表達(dá)大量細(xì)胞間粘附分子I（ICAM-1），導(dǎo)致甲狀腺腫大�？蒲腥藛T通過制備單克隆抗體，對治療GD進(jìn)行了嘗試。

（1）用ICAM-1作為抗原間隔多次免疫若干只小鼠，幾周后取這些免疫小鼠的血清，分別加入多孔培養(yǎng)板的不同孔中，多孔培養(yǎng)板中需加入______________以檢測這些小鼠產(chǎn)生的抗體。依據(jù)反應(yīng)結(jié)果，選出_______________反應(yīng)最強(qiáng)的培養(yǎng)孔所對應(yīng)的小鼠M．

（2）實(shí)驗(yàn)所用骨髓瘤細(xì)胞需置于______________的氣體環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)，融合前將部分培養(yǎng)細(xì)胞置于選擇培養(yǎng)基中培養(yǎng)，一段時(shí)間后培養(yǎng)基中_______________填（“有”或“無”）骨髓瘤細(xì)胞生長，說明培養(yǎng)基符合實(shí)驗(yàn)要求。

（3）從小鼠M的脾臟中取相應(yīng)細(xì)胞制備成細(xì)胞懸液，與實(shí)驗(yàn)用骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，用選擇培養(yǎng)基篩選得到具有______________能力的細(xì)胞。將獲得的上述細(xì)胞在多孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)、檢測，篩選出符合要求的雜交瘤細(xì)胞，植入小鼠腹腔中進(jìn)行克隆培養(yǎng)，一段時(shí)間后從小鼠腹水中提取實(shí)驗(yàn)用抗體，其與常規(guī)的血清抗體相比，優(yōu)越性體現(xiàn)在______________。

（4）若進(jìn)一步比較實(shí)驗(yàn)用抗體和131I對GD模型小鼠的治療作用，可將若干GD模型小鼠等分為三組，請補(bǔ)充下表中的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)__________。

對照組（A）	131I治療組（B）	單克隆抗體治療組（C）
給GD模型小鼠腹腔注射0．1 ml無菌生理鹽水	給GD模型小鼠腹腔注射溶于0．1 ml無菌生理鹽水131I	___________________________

Answer 1

【答案】ICAM-1 陽性（或“抗原一抗體”） 95%空氣+5% CO2 無 無限增殖（或既能無限增殖又能產(chǎn)生抗體） 特異性強(qiáng)、靈敏度高、可大量制備 給GD模型小鼠腹腔注射溶于0．1 mL無菌生理鹽水的抗ICAM-1單克隆抗體

【解析】

1、單克隆抗體：由單個(gè)B淋巴細(xì)胞進(jìn)行無性繁殖形成的細(xì)胞系所產(chǎn)生出的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體.具有特異性強(qiáng)、靈敏度高，并可能大量制備的特點(diǎn)。

2、單克隆抗體的制備過程：首先用特定抗原注射小鼠體內(nèi)，使其發(fā)生免疫，小鼠體內(nèi)產(chǎn)生具有免疫能力的B淋巴細(xì)胞。利用動物細(xì)胞融合技術(shù)將B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，單克隆抗體制備過程中的兩次篩選：第一次篩選：利用特定選擇培養(yǎng)基篩選，獲得雜交瘤細(xì)胞，即AB型細(xì)胞（A為B淋巴細(xì)胞，B為骨髓瘤細(xì)胞），不需要A、B、AA、BB型細(xì)胞。第二次篩選：利用多孔板法和抗原-抗體雜交法篩選，獲得產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞。

（1）用ICAM-1作為抗原間隔多次免疫若干只小鼠，幾周后取這些免疫小鼠的血清，分別加入多孔培養(yǎng)板的不同孔中，多孔培養(yǎng)板中需加入ICAM-1以檢測這些小鼠產(chǎn)生的抗體。依據(jù)反應(yīng)結(jié)果，選出陽性（或“抗原-抗體”）反應(yīng)最強(qiáng)的培養(yǎng)孔所對應(yīng)的小鼠M。

（2）實(shí)驗(yàn)用骨髓瘤細(xì)胞置于95%空氣+5%CO2恒溫培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)，融合前將部分培養(yǎng)細(xì)胞置于含HAT的選擇培養(yǎng)基中培養(yǎng)，一段時(shí)間后培養(yǎng)基中無骨髓瘤細(xì)胞生長，說明培養(yǎng)基符合實(shí)驗(yàn)要求。

（3）取小鼠M的脾臟細(xì)胞制備成細(xì)胞懸液，與實(shí)驗(yàn)用骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，用選擇培養(yǎng)基篩選得到具有無限增殖能力的細(xì)胞。與常規(guī)的血清抗體相比，單克隆抗體具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、可大量制備等特點(diǎn)。

（4）根據(jù)題干中實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹氨容^實(shí)驗(yàn)用抗體和1311對GD模型小鼠的治療作用”，單克隆抗體治療組（C）中應(yīng)給GD模型小鼠腹腔注射溶于0.1mL無菌生理鹽水的抗ICAM-1單克隆抗體。