Question

【題目】檢驗水中的細(xì)菌、病毒的含量是有效監(jiān)控部分疾病發(fā)生的必要措施，某學(xué)習(xí)小組為了調(diào)查某河流的水質(zhì)情況，測定了該河流水樣中的細(xì)菌含量，并進(jìn)行了細(xì)菌的分離等工作，請回答下列有關(guān)的問題：

(1)該小組采用平板劃線法分離水樣中的細(xì)菌。操作時，一般需要配制含有____、水、無機(jī)鹽的固體培養(yǎng)基，在劃線時，接種環(huán)通過______滅菌。劃線的某個平板培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域都不間斷地長滿了菌，第二區(qū)域所劃的第一條線上無菌落，其他劃線上有菌落，造成劃線無菌落可能的操作失誤有①_____________；②________________。

(2)該小組采用稀釋涂布平板法檢測水樣中的細(xì)菌含量。在涂布平板時，滴加到培養(yǎng)基表面的稀釋液量不宜過多的原因是_______________。將1mL水樣稀釋100倍，在3個平板上用涂布法分別接入0.2mL稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個平板上的菌落數(shù)分別為62、64和66。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為______。

(3)該小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻，一部分進(jìn)行靜置培養(yǎng)，另一部分進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長速度快。分析其原因是：振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液的________的含量，同時可以使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高________的利用率。

Answer 1

【答案】碳源、氮源 灼燒 ①第二次劃線前接種環(huán)灼燒后未冷卻 ②劃線未從第一區(qū)域末端開始 培養(yǎng)基表面出現(xiàn)積液，導(dǎo)致菌體堆積，影響分離效果 3. 2×l07個 溶解氧 營養(yǎng)物質(zhì)

【解析】

1、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的基本過程為計算、稱量、溶化、調(diào)pH、滅菌、倒平板五個步驟。

2、微生物常見的接種的方法：

①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落。

②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落。

3、劃線分離操作中的有關(guān)問題：

①在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)，在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)。

	第一次灼燒	每次劃線之前灼燒	劃線結(jié)束灼燒
目的	避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)基	殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種	殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染或感染操作者

②在灼燒接種環(huán)之后，要等其冷卻后再進(jìn)行劃線，以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。

③在進(jìn)行第二次以及其后的劃線操作時'要從上一次劃線的末端開始劃線。每次劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落。

（1）培養(yǎng)基的成分一般包括：水、無機(jī)鹽、碳源和氮源，有的微生物還需要添加生長因子。微生物的接種方法可以采用平板劃線法進(jìn)行接種，接種時接種環(huán)需要灼燒滅菌處理。在劃線接種時，在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)，在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)。因此如果劃線的某個平板培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域都不間斷地長滿了菌，第二區(qū)域所劃的第一條線上無菌落，其他劃線上有菌落，造成劃線無菌落可能的操作失誤有①第二次劃線前接種環(huán)灼燒后未冷卻；②劃線未從第一區(qū)域末端開始。

（2）稀釋涂布平板法操作時，滴加到培養(yǎng)基表面的稀釋液量如果過多，會導(dǎo)致培養(yǎng)基表面出現(xiàn)積液，引起菌體堆積，影響分離效果。將1mL水樣稀釋100倍，在3個平板上用涂布法分別接入0.2mL稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個平板上的菌落數(shù)分別為62、64和66，據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為（62+64+66）÷3×100×（1÷0.2）×1000=3.2×107個。

（3）振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液的溶解氧的含量，同時可以使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高營養(yǎng)物質(zhì)的利用率。