Question

13．回答下列關(guān)于遺傳信息的傳遞與表達(dá)的問題
為了探究基因在高等動物體內(nèi)不兩發(fā)育階段和不同類型的細(xì)胞中表達(dá)的持異性，通常以綠色熒光蛋白編碼基因（GFP）作為目的基因構(gòu)建轉(zhuǎn)基因動物．
（1）獲得GFP基因的方法一般包括從相關(guān)生物細(xì)胞中分離和人工化學(xué)合成．
（2）若使用限制酶PstI（識別序列和切割位點如圖2A所示）切開GFP，其產(chǎn)生的末端應(yīng)該為圖1中D．

（3）已知圖2B所示質(zhì)粒經(jīng)EcoRI和AatII聯(lián)合酶切后形成1.0kb和3.2kb （1kb=1000對堿基）兩種DNA片段，若將0.8kb的單個基因插在質(zhì)粒的PstI位點處，所形成的重組質(zhì)粒用EcoRI和AatII聯(lián)合酶切后，能形成兩種DNA片段，其大小應(yīng)分別為1.8kb和3.2kb．
（4）將上述重組質(zhì)粒導(dǎo)入小鼠受精卵雄性原核中的常規(guī)方法是顯微注射．
（5）經(jīng)上述受精卵移植發(fā)育而成且頭部發(fā)熒光的轉(zhuǎn)基因小鼠中，全身各種組織或細(xì)胞均含有的物質(zhì)是A．
①GFP基因   ②GFPmRNA   ③GFP蛋白
A．①B．①②C．②③D．①②③

Answer 1

分析 1、基因工程的工具：
（1）限制酶：能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂．
（2）DNA連接酶：連接的是兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵．
（3）運載體：常用的運載體：質(zhì)粒、噬菌體的衍生物、動植物病毒．
2、基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）GFP基因為目的基因，獲得GFP基因的方法一般包括：從相關(guān)生物細(xì)胞中分離和人工化學(xué)合成．
（2）限制酶PstI的識別序列及切割位點為：，因此用限制酶PstI切開GFP，其產(chǎn)生的末端應(yīng)該為．
（3）已知圖2B所示質(zhì)粒經(jīng)EcoRI和AatII聯(lián)合酶切后形成1.0kb和3.2kb （1kb=1000對堿基）兩種DNA片段，若將0.8kb的單個基因插在質(zhì)粒的PstI位點處，所形成的重組質(zhì)粒用EcoRI和AatII聯(lián)合酶切后，能形成兩種DNA片段，其大小應(yīng)分別為1.0+0.8=1.8kb和3.2kb．
（4）將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞最有效的方法是顯微注射法．
（5）轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)的所有細(xì)胞都是由受精卵有絲分裂形成的，因此都含有GFP基因，但由于基因的選擇性表達(dá)，該基因只在頭部細(xì)胞中才表達(dá)，則只有頭部細(xì)胞中采用相應(yīng)的mRNA和蛋白質(zhì)．
故答案為：
（1）從相關(guān)生物細(xì)胞中分離      人工化學(xué)合成
（2）D          
（3）1.8     3.2
（4）顯微注射        
（5）A

點評 本題結(jié)合圖解，考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的概念、原理、操作工具及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能結(jié)合圖中信息準(zhǔn)確答題．