Question

12．臨床實驗表明，服用乳酸菌及其制品具有減少人體血清膽固醇含量、降低心腦血管發(fā)病率的功效．下面是從酸奶中篩選出高效降低膽固醇的乳酸菌的實驗，請回答下列問題：
（1）制備固體培養(yǎng)基（MRS）：在普通的液體培養(yǎng)基中添加碳酸鈣和瓊脂，加熱使其熔化，然后轉(zhuǎn)移到錐形瓶中．經(jīng)高壓蒸汽滅菌法處理后，待其冷卻至50℃左右，在酒精燈火焰附近倒平板．
（2）將少量酸奶制成1：10稀釋液，再將梯度稀釋到10^-6的稀釋液涂布于添加了碳酸鈣的乳酸菌培養(yǎng)基（MRS培養(yǎng)基）平板上，在無氧（填“有氧”或“無氧”）條件下37℃恒溫培養(yǎng)72h．挑取有（填“有”或“無”）溶鈣圈（或透明圈）的菌落，用平板劃線法接種在MRS培養(yǎng)基上反復(fù)純化至純種備用．
（3）在普通的MRS液體培養(yǎng)基中添加適量膽固醇并用超聲波振蕩乳化20min，調(diào)PH至7.0，然后將純化后的乳酸菌菌株接種到高膽固醇培養(yǎng)液中培養(yǎng)，一段時間后用特定顯色劑分光光度法離心測定上清液中膽固醇的含量，以未接種的高膽固醇培養(yǎng)液作為對照，測定菌株降膽固醇的能力，篩選出目的菌株．

Answer 1

分析 1、消毒和滅菌

	消毒	滅菌
概念	使用較為溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物（不包芽孢和孢子）	使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所用的微生物（包括芽孢和孢子）
常用方法	煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥劑消毒法、紫外線消毒法	灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌
適用對象	操作空間、某些液體、雙手等	接種環(huán)、接種針、玻璃器皿、培養(yǎng)基等

2、微生物常見的接種的方法
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落．

解答 解：（1）制備固體培養(yǎng)基需要加入凝固劑--瓊脂；對培養(yǎng)基的滅菌需要采用高壓蒸汽滅菌法．
（2）乳酸菌屬于厭氧菌，因此需要在無氧條件下培養(yǎng)．挑取有溶鈣圈（或透明圈）的菌落，用平板劃線法接種在MRS培養(yǎng)基上反復(fù)純化至純種備用．
（3）在普通的MRS液體培養(yǎng)基中添加適量膽固醇并用超聲波振蕩乳化20min，調(diào)PH至7.0，然后將純化后的乳酸菌菌株接種到高膽固醇培養(yǎng)液中培養(yǎng)，一段時間后用特定顯色劑分光光度法離心測定上清液中膽固醇的含量，以未接種的高膽固醇培養(yǎng)液作為對照，測定菌株降膽固醇的能力，篩選出目的菌株．
故答案為：
（1）瓊脂       高壓蒸汽滅菌
（2）無氧       有      平板劃線
（3）膽固醇       膽固醇       未接種的高膽固醇培養(yǎng)液

點評 本題考查微生物的分離和培養(yǎng)，要求考生識記無菌技術(shù)；識記接種微生物常用的兩種方法，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題．