Question

【題目】大腸桿菌是人和許多動物腸道中最主要且數(shù)量最多的一類細(xì)菌，含有2000種以上的蛋白質(zhì)�；卮鹣铝袉栴}：

（1）大腸桿菌的培養(yǎng)基為牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，此培養(yǎng)基為大腸桿菌的生長提供____________。培養(yǎng)大腸桿菌時，在接種前通常需要檢測固體培養(yǎng)基是否被污染，檢測的方法是___________。

（2）利用平板劃線法純化大腸桿菌時，通過接種環(huán)在培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線，將聚集的菌種________分散到培養(yǎng)基的表面；長期保存純化后的菌種，可以采用_______的方法。稀釋涂布平板法是根據(jù)培養(yǎng)基上的菌落的數(shù)目來推測樣品中的活菌數(shù)，其原理是_________________________________。

（3）利用凝膠色譜法分離大腸桿菌蛋白質(zhì)過程如圖一，正確的加樣順序是______________。圖二、圖三分別是同學(xué)甲、乙利用同一種樣品分離得到的結(jié)果，則圖三中與圖二中蛋白質(zhì)P對應(yīng)的是_____。

Answer 1

【答案】碳源、氮源、維生素、水和無機(jī)鹽 將未接種的培養(yǎng)基在適宜的條件下培養(yǎng)一段時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落出現(xiàn) 逐步稀釋 甘油管藏 培養(yǎng)基表面的一個菌落來源于樣品中的一個活菌 ②③④① 丙

【解析】

凝膠色譜法的原理是：小分子蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道,路程較長、移動速度較慢，后被洗脫出來:而分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)無法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程較長、移動速度較快，先被洗脫出來。

（1）微生物生長都需要碳源、氮源、水和無機(jī)鹽等基本條件，蛋白陳是將肉、酪素或明膠用酸或蛋白酶水解后干燥而成，富含有機(jī)氮化合物，也含有一些維生素和糖類，因此添加在培養(yǎng)基中主要作為氮源，也可提供碳源和維生素，故牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基可為大腸桿菌提供碳源、氮源、維生素、水和無機(jī)鹽；檢測培養(yǎng)基是否被污染，需在接種前將空白培養(yǎng)基即未接種的培養(yǎng)基放在適宜的條件下放置一段時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落出現(xiàn)，若有菌落出現(xiàn)，則說明培養(yǎng)基被污染或滅菌不徹底，不能用于接種實(shí)驗(yàn)；

（2）平板劃線法是一種通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面的接種方法；若要長期保存純化后的菌種，可以采用甘油管藏的方法；稀釋涂布平板法可用于活菌的計(jì)數(shù)是因?yàn)榕囵B(yǎng)基表面的一個菌落來源于樣品中的一個活菌；

（3）利用凝膠色譜法分離大腸桿菌蛋白質(zhì)時正確的加樣順序是調(diào)整緩沖液面、滴加透析樣品、演那個品滲入凝膠床、再調(diào)整緩沖液面，故順序?yàn)棰冖邰堍伲?/span>SDS凝膠電泳裝置是垂直的裝置，此種電泳方法主要取決于蛋白質(zhì)分子量的大小，與電荷無關(guān)，同時加樣在“-”極，通電后，樣品蛋白質(zhì)向“+”極移動，分子量相對小的，移動距離大，因此從圖二的電泳結(jié)果分析，P比N、M移向“+”距離大，說明P的分子量相對比較小，因此洗脫出來的時間比較長，符合圖三中的丙。