Question

如圖為人工合成reAnti基因，轉(zhuǎn)入豬成纖維細(xì)胞，做成轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育過程示意圖，請(qǐng)據(jù)圖回答

（1）人工合成的reAnti基因可通過

 

技術(shù)手段體外迅速擴(kuò)增．
（2）過程③要將重組質(zhì)粒導(dǎo)入豬胎兒成纖維細(xì)胞的方法是

 

，重組質(zhì)粒導(dǎo)入之后，可通過

 

技術(shù)，來檢測reAnti基因是否已重組到豬胎兒成纖維細(xì)胞的染色體DNA上．
（3）從豬中取胎兒成纖維細(xì)胞，用

 

處理，然后進(jìn)行分散培養(yǎng)．培養(yǎng)時(shí)，將培養(yǎng)瓶置于含

 

（要求寫清楚每種氣體所占比例）的混合氣體培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素等，一般還應(yīng)添加

 

．
（4）去核前的卵母細(xì)胞應(yīng)培養(yǎng)到

 

期．其去核后與成纖維細(xì)胞通過電刺激后融合，形成重組細(xì)胞．再利用物理或化學(xué)方法刺激，使之完成細(xì)胞分裂和發(fā)育，在體外培養(yǎng)成重組早期胚胎．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù),動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)過程

專題：

分析：分析題圖：①是獲取目的基因的過程；②是基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程；③將重組質(zhì)粒導(dǎo)入豬胎兒成纖維細(xì)胞的過程；④采用顯微技術(shù)去核；⑤是核移植過程；⑥動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程；⑦是胚胎移植過程；⑧是妊娠形成轉(zhuǎn)基因克隆豬的過程．

解答： 解：（1）人工合成的reAnti基因可通過PCR技術(shù)手段擴(kuò)增．
（2）過程③要將重組質(zhì)粒導(dǎo)入豬胎兒成纖維細(xì)胞的方法是顯微注射法，目的基因（reAnti基因）是否已重組到豬胎兒成纖維細(xì)胞的染色體上，可用DNA分子雜交技術(shù)進(jìn)行檢測．
（3）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，需要用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理動(dòng)物組織，使動(dòng)物細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)要放入到95%的空氣（保證細(xì)胞代謝）和5%CO₂（調(diào)節(jié)培養(yǎng)液的PH）培養(yǎng)箱中．培養(yǎng)液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素等，一般還應(yīng)添加動(dòng)物血清．
（4）去核前的卵母細(xì)胞應(yīng)培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂中期才成熟，其去核后與成纖維細(xì)胞通過電刺激后融合，形成重組細(xì)胞，再利用物理或化學(xué)方法刺激，使之完成細(xì)胞分裂和發(fā)育，在體外培養(yǎng)成重組早期胚．
故答案為：
（1）PCR    
（2）顯微注射法   DNA分子雜交
（3）胰蛋白酶     95%的空氣和5%CO2    動(dòng)物血清
（4）減數(shù)第二次分裂中期

點(diǎn)評(píng)：本題結(jié)合我國首例綠色熒光蛋白（GFP）轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育過程示意圖，考查基因工程的原理和技術(shù)、動(dòng)物細(xì)胞核移植技術(shù)、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)，要求考生識(shí)記基因工程的原理及操作過程，能準(zhǔn)確判斷圖中各過程的名稱；識(shí)記動(dòng)物細(xì)胞核移植的概念及過程；識(shí)記動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程及條件．