Question

基因工程自20世紀(jì)70年代興起后，發(fā)展迅猛，成果顯著。
Ⅰ利用大腸桿菌生產(chǎn)人胰島素時(shí)，構(gòu)建的表達(dá)載體含有人胰島素基因及其啟動(dòng)子等，其中啟動(dòng)子的作用是       _______________________________  。在用表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌時(shí)，常用            處理大腸桿菌，以利于表達(dá)載體進(jìn)入；為了檢測(cè)胰島素基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，可用標(biāo)記的胰島素基因片段作探針與mRNA雜交，該雜交技術(shù)稱為       __________   。為了檢測(cè)胰島素基因轉(zhuǎn)錄的mRNA是否翻譯成蛋白質(zhì)，常用______________________技術(shù)。
Ⅱ近10年來(lái)，PCR技術(shù)（多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）成為分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的一種常規(guī)手段，下圖為PCR原理示意圖，據(jù)圖回答問題。

（1）基因工程中，利用PCR技術(shù)來(lái)________________，PCR技術(shù)依據(jù)的原理是DNA的半保留復(fù)制，生物體內(nèi)也能完成DNA的復(fù)制，但有所不同，圖中A過程稱為____________，在生物體內(nèi)需要______________才能完成。圖中B 過程的完成需要_______________________________________等條件。
（2）若DNA樣品的長(zhǎng)度為100個(gè)堿基對(duì)，且A占15%，則完成三次循環(huán)，共需要提供的胞嘧啶脫氧核苷酸___________個(gè)。

Answer 1

（13分）
Ⅰ RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位(2分)    Ca²⁺    分子雜交技術(shù)  
Ⅱ （1）擴(kuò)增目的基因  解旋（變性）  DNA解旋酶
樣品DNA的兩條鏈為模板、四種脫氧核苷酸、Taq酶（3分，漏1個(gè)扣1分）；
（2）490（2分）

解析試題分析：
Ⅰ利用大腸桿菌生產(chǎn)人胰島素時(shí)，構(gòu)建的表達(dá)載體含有人胰島素基因及其啟動(dòng)子等，其中啟動(dòng)子的作用是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，能驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄出信使RNA，最終獲得所需要的蛋白質(zhì)。在用表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌時(shí)，常用Ca²⁺ 處理大腸桿菌，使得受體細(xì)胞成為感受態(tài)細(xì)胞，以利于表達(dá)載體進(jìn)入；標(biāo)記的胰島素基因片段作探針與mRNA雜交稱為分子雜交技術(shù)。為了檢測(cè)胰島素基因轉(zhuǎn)錄的mRNA是否翻譯成蛋白質(zhì)，常用抗原—抗體雜交技術(shù)。
Ⅱ（1）基因工程中，利用PCR技術(shù)來(lái)擴(kuò)增目的基因，圖中A過程稱為解旋（高溫變性），在生物體內(nèi)需要DNA解旋酶才能完成。圖中B 過程是低溫復(fù)性，條件需要DNA的兩條鏈為模板、四種脫氧核苷酸、Taq酶、一對(duì)引物等。
（2）若DNA樣品的長(zhǎng)度為100個(gè)堿基對(duì)，且A占15%，則胞嘧啶=200×35%=70，,完成三次循環(huán)，共需要提供的胞嘧啶脫氧核苷酸=(2³-1) ×70=490個(gè)。
考點(diǎn)：基因工程的步驟，PCR技術(shù)和半保留復(fù)制的計(jì)算。
點(diǎn)評(píng)：本題有一定的綜合性，意在考查學(xué)生識(shí)記和理解能力。