Question

下圖是利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人胰島素的操作過程示意圖，請(qǐng)據(jù)圖作答。

（1）能否利用人的皮膚細(xì)胞來完成①過程？　　 。原因是　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　。

（2）過程②稱為　　　　　　　　　 。

（3）為使過程⑧更易進(jìn)行，可用　　　 處理D。為了檢測(cè)大腸桿菌是否產(chǎn)生了人胰島素，可采用的方法是　　　　　　　　　 。

（4）下圖為上圖中質(zhì)粒B的簡(jiǎn)圖，小箭頭所指分別為限制性內(nèi)切酶EcoRI、BamHI的酶切位點(diǎn)，amp^R為青霉素抗性基因，tct^R為四環(huán)素抗性基因，P為啟動(dòng)子，T為終止子，ori為復(fù)制原點(diǎn)。已知目的基因的兩端分別有包括EcoRI、BamHI在內(nèi)的多種酶的酶切位點(diǎn)。

①將用EcoRI切割后的目的基因與質(zhì)粒用DNA連接酶進(jìn)行連接，其中由兩個(gè)DNA片段之間連接形成的產(chǎn)物有　　 種。

②將上述連接產(chǎn)物導(dǎo)入無任何抗藥性的大腸桿菌細(xì)胞中然后接種到含青霉素的培養(yǎng)基中，能生長(zhǎng)的大腸桿菌所含有的連接產(chǎn)物是 。

③在上述實(shí)驗(yàn)中，為了防止目的基因和質(zhì)粒在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，酶切時(shí)應(yīng)選用的酶是　　　　　　　　 。

（5）若要使A在體外通過③④⑤過程擴(kuò)增，那么在此過程中所使用的酶是　　　　　　 。除酶外還需要加入引物，其作用是　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

（6）如果用該技術(shù)將一個(gè)位于DNA一端的目的基因進(jìn)行擴(kuò)增，那么連續(xù)擴(kuò)增4次后，只含目的基因的DNA占全部DNA的比例是　　 　　 。

Answer 1

（1）不能  皮膚細(xì)胞中的胰島素基因未表達(dá)（或未轉(zhuǎn)錄），不能形成胰島素mRNA

（2）反轉(zhuǎn)錄    （3）Ca²⁺   抗原-抗體雜交  （4）①  3     ②目的基因--質(zhì)粒連接物、質(zhì)粒--質(zhì)粒連接物     

 ③EcoRI和BamHI

（5）耐熱DNA聚合酶

使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸

（6）11/16