Question

【題目】請根據(jù)血紅蛋白的提取和分離流程圖回答問題：

（1）將實驗流程按先后順序補充完整：_______、_______。

（2）凝膠色譜法的基本原理是根據(jù)_______分離蛋白質。

（3）洗滌紅細胞的目的是去除______,洗滌干凈的標志是_____。為防止血液凝固,在采血容器中要預先加入____________。

（4）下面是凝膠色譜法分離血紅蛋白時樣品加入過程的示意圖,正確的加樣順序是_____。

（5）在裝填色譜柱時不得有氣泡存在,因為_____________。在凝膠色譜操作過程中,不能發(fā)生_________的情況,一旦發(fā)生這種情況,需重新裝填凝膠色譜柱。如果紅色區(qū)帶______,說明色譜柱制作成功。

Answer 1

【答案】 血紅蛋白的釋放 凝膠色譜柱的裝填 相對分子質量的大小 雜蛋白（或血漿蛋白） 離心后的上清液中沒有黃色 檸檬酸鈉 ④①②③ 氣泡會攪亂洗脫液中蛋白質的洗脫次序，降低分離效果 洗脫液流干、露出凝膠顆粒 均勻一致地移動

【解析】（1）樣品處理包括:紅細胞的洗滌、血紅蛋白的釋放、分離血紅蛋白溶液。凝膠色譜操作包括:凝膠色譜柱的制作、凝膠色譜柱的裝填、樣品的加入和洗脫。

（2）凝膠色譜法的基本原理是根據(jù)相對分子質量的大小分離蛋白質。

（3）洗滌紅細胞的目的是去除雜蛋白，以利于后續(xù)步聚的分離純化。洗滌干凈的標志是離心后的上清液不再呈現(xiàn)黃色。為防止血液凝固，在采血容器中要預先加入抗凝血劑檸檬酸鈉，其比例是每100 mL血液加入3.0 g檸檬酸鈉。

（4）加樣順序是調(diào)整緩沖液面、滴加透析樣品、樣品滲入凝膠床、再調(diào)整緩沖液面，即④①②③。

（5）在裝填凝膠色譜柱時,不得有氣泡產(chǎn)生,因為氣泡會攪亂洗脫液中蛋白質的洗脫順序,降低分離效果。在凝膠色譜操作過程中,不能發(fā)生洗脫液流干、露出凝膠蛋白顆粒的現(xiàn)象。如果紅色區(qū)帶均勻一致地移動,說明色譜柱制作成功。