Question

人外周血單核細(xì)胞能合成白介素2（IL-2），是含有113個(gè)氨基酸殘基的糖蛋白，該蛋白可增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，但在體內(nèi)易被降解．研究人員將IL-2基因與人血清白蛋白（HSA）基因拼接成一個(gè)融合基因，并在受體細(xì)胞中表達(dá)，獲得具有IL-2生理功能、且不易降解的IL-2-HSA融合蛋白．其技術(shù)流程如圖．請(qǐng)回答：
（1）培養(yǎng)人外周血單核細(xì)胞時(shí)，需要通入

 

（氣體）；圖中②表示

 

過程．
（2）位點(diǎn)a應(yīng)能被

 

限制酶切割．為了使融合基因能夠完整表達(dá)出所需產(chǎn)物，應(yīng)將表達(dá)載體2導(dǎo)入的受體細(xì)胞是

 

（填大腸桿菌或酵母菌）．
（3）檢測(cè)工程菌是否合成了IL-2-HSA融合蛋白，應(yīng)采用

 

方法．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：分析題圖：①表示從人的外周學(xué)細(xì)胞去mRNA；②表示以mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA的過程；③表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程，需要限制酶和DNA連接酶．目的基因IL-2cDNA的兩端的酶切位點(diǎn)分別是EcoRⅠ和BglⅡ，所以表達(dá)載體1也必須有這兩個(gè)酶切位點(diǎn)，而表達(dá)載體1上已有EcoRⅠ，因此位點(diǎn)a應(yīng)含有BglⅡ．

解答： 解：（1）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)所需要的條件是：95%空氣和5%CO₂氣體環(huán)境、適宜溫度（37℃）和PH、無毒無菌的環(huán)境及合適的營(yíng)養(yǎng)成分，其培養(yǎng)基中通常需加入血清、血漿等一些天然成分；圖中②mRNA→cDNA，表示逆轉(zhuǎn)錄過程．
（2）目的基因IL-2cDNA和表達(dá)載體1在構(gòu)建表達(dá)載體2時(shí)需先用限制酶切割讓二者獲得相同的黏性末端，然后在DNA連接酶的作用下重新組合．根據(jù)目的基因IL-2cDNA的兩端的酶切位點(diǎn)分別是EcoRⅠ和BglⅡ，所以表達(dá)載體1也必須有這兩個(gè)酶切位點(diǎn)，而表達(dá)載體1上已有EcoRⅠ，因此位點(diǎn)a應(yīng)被BglⅡ限制酶切割．
（3）應(yīng)用抗原-抗體雜交技術(shù)可檢測(cè)酵母菌是否表達(dá)出IL-2-HSA融合蛋白．
故答案為：
（1）O₂和CO₂   逆轉(zhuǎn)錄   
（2）BglⅡ酵母菌
（3）抗原-抗體雜交

點(diǎn)評(píng)：本題結(jié)合流程圖，考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生能夠識(shí)記動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件；掌握限制酶的作用特點(diǎn)；識(shí)記目的基因分子水平檢測(cè)的方法等．