Question

【題目】埃博拉病毒（EBO）呈纖維狀，EBO衣殼外有包膜，包膜上有5種蛋白棘突（VP系列蛋白和GP蛋白），其中GP蛋白最為關鍵，能被宿主細胞強烈識別。請回答下列問題：

（1）基因疫苗指的是DNA疫苗，要獲得編碼GP蛋白抗原的基因疫苗，首先要提取出病原體的RNA，并以RNA為模板通過___________法合成DNA。要大量獲得表達特異抗原的基因，可采用___________技術進行擴增。該技術必須需要脫氧核苷酸、ATP、____________、模板_________以及______________酶。

（2）以GP蛋白作為疫苗比基因疫苗更安全，其原因是GP蛋白自身沒有感染力，但保留有__________的特性。為了從牛分泌的乳汁中生產GP蛋白，在基因導入牛的___________（受體細胞）前，基因的首端必須含有使其特異性表達的__________________，才能驅動轉錄過程，這種通過分泌乳汁來生產所需要的藥品的轉基因動物稱為_______________。轉基因牛是否培育成功，可以通過_____________技術從分子水平進行檢測。

（3）為了獲得純凈的針對EBO的單一抗體，科研人員利用經EBO免疫后小鼠的_____________與鼠的骨髓瘤細胞進行融合，需要通過兩次篩選后才能得到所需要的細胞，其中第一次篩選的目的是為了得到_____________細胞，第二次篩選的目的是為了得到能夠產生針對__________________的___________________細胞，通過這種方法獲得的抗體，其特點是___________________，可以用此抗體與藥物制成“生物導彈”，抗擊EBO。

Answer 1

【答案】反轉錄 PCR技術 引物 DNA Taq 抗原 受精卵 牛乳腺蛋白基因的啟動子 乳腺（房）生物反應器 抗原—抗體雜交 B淋巴細胞 雜交瘤 EBO 雜交瘤 特異性強、靈敏度高，并可大量制備

【解析】

1、基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成。
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。
（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法。
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因—DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA—分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質—抗原-抗體雜交技術。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。
2、單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應，之后從小鼠脾臟中獲取已經免疫的B淋巴細胞；誘導B細胞和骨髓瘤細胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞；進行抗體檢測，篩選出能產生特定抗體的雜交瘤細胞；進行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體。

（1）以RNA為模板合成DNA的過程稱為逆轉錄。PCR技術可在體外大量擴增目的基因。PCR技術屬于體外DNA復制過程，該過程需要脫氧核苷酸、ATP、引物、模板DNA以及Taq酶。

（2）以GP蛋白作為疫苗比基因疫苗更安全，其原因是GP蛋白自身沒有感染力，但保留有抗原性，可引起機體產生特異性免疫，但不會致病。培育轉基因動物時，應該以受精卵作為受體細胞；要使目的基因只在乳腺組織中表達，基因的首端必須含有使其特異性表達的乳腺蛋白基因的啟動子；這種通過分泌乳汁來生產所需要的藥品的轉基因動物稱為乳腺（房）生物反應器。轉基因牛是否培育成功，可以通過抗原—抗體雜交技術從分子水平進行檢測。

（3）制備單克隆抗體時，應該用經EBO免疫后小鼠的B淋巴細胞與鼠的骨髓瘤細胞進行融合；融合后的細胞需要通過兩次篩選后才能得到所需要的細胞，其中第一次篩選的目的是為了得到雜交瘤細胞，第二次篩選的目的是為了得到能夠產生針對EBO的雜交瘤細胞。單克隆抗體的特點是特異性強、靈敏度高，并可大量制備。