Question

【題目】請分析以下資料，并回答問題。

資料甲：科學家將牛生長激素基因導入小鼠受精卵中，得到了體型巨大的“超級小鼠”。

資料乙：科學家通過對鼠和人控制抗體產生的基因進行拼接，實現(xiàn)了對鼠源雜交瘤抗體的改造，生產出對人體的不良反應減少、效果更好的“鼠—人”嵌合抗體，用于癌癥治療。

（1）據(jù)資料甲，為擴增出大量的目的基因（牛生長激素基因）需用到PCR技術。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是____________；PCR擴增時退火溫度的設定是成敗的關鍵，如果PCR反應得不到任何擴增產物，則可以采取的改進措施有_______________________________。

（2）據(jù)資料甲，目前在PCR反應中使用Taq酶而不使用大腸桿菌DNA聚合酶的主要原因是____________________________________________；導入前需構建基因表達載體，表達載體含有牛生長激素基因及其啟動子等，其中啟動子的作用是___________________________。

（3）據(jù)資料乙，鼠源雜交瘤抗體就是從免疫小鼠的脾臟細胞中獲取B淋巴細胞，在誘導劑的作用下與___________融合，形成____________細胞，并通過體內培養(yǎng)或體外培養(yǎng)生產單克隆抗體。與植物原生質體的融合相比，動物細胞融合在誘導融合方法方面的主要區(qū)別是還常用__________________誘導融合。

（4）)在制備單克隆“鼠—人”嵌合抗體過程中要進行兩次篩選，第一次篩選的目的是_________________________；第二次篩選的目的是__________________________。

Answer 1

【答案】加熱至90～95℃??? 降低退火溫度（或重新設計引物，或其它合理答案）??? Taq酶熱穩(wěn)定性高，而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下會失活??? 提供RNA聚合酶識別和結合的位點，驅動基因轉錄??? 骨髓瘤細胞??? 雜交瘤??? 滅活的病毒??? 獲得雜交瘤細胞??? 獲得能夠產生特異性抗體的雜交瘤細胞???

【解析】

1、基因工程的操作步驟：獲取目的基因（基因文庫獲取、PCR、人工合成等）；構建基因表達載體（含目的基因、標記基因、啟動子、終止子、復制原點）；把目的基因導入受體細胞（動物-顯微注射法；植物-農桿菌轉化法、基因槍法、花粉管通道法；微生物-鈣離子處理法）；目的基因的檢測和鑒定（分子水平和個體水平）。2、單克隆抗體的制備（1）制備產生特異性抗體的B淋巴細胞：向免疫小鼠體內注射特定的抗原，然后從小鼠脾內獲得相應的B淋巴細胞。（2）獲得雜交瘤細胞①將鼠的骨髓瘤細胞與脾細胞中形成的B淋巴細胞融合；②用特定的選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞，該雜種細胞既能夠增殖又能產生抗體。（3）克隆化培養(yǎng)和抗體檢測。（4）將雜交瘤細胞在體外培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔內增殖。（5）提取單克隆抗體：從細胞培養(yǎng)液或小鼠的腹水中提取。

（1）在體外利用PCR技術擴增目的基因時，利用DNA的高溫變性加熱至90-95℃，破壞雙鏈之間的氫鍵，使DNA解鏈變?yōu)閱捂�。如�?/span>PCR反應得不到任何擴增產物，則可以采取的改進措施有降低退火溫度、重新設計引物等。
（2）目前在PCR反應中使用Taq酶而不使用大腸桿菌DNA聚合酶的主要原因是：PCR技術需要高溫加熱，Taq酶熱穩(wěn)定性高，而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下會失活。啟動子的作用是提供RNA聚合酶識別和結合的位點，驅動基因轉錄。
（3）鼠源雜交瘤抗體就是從免疫的小鼠脾臟細胞中獲取B淋巴細胞，在誘導劑的作用下與骨髓瘤細胞融合，形成雜交瘤細胞，并通過體內培養(yǎng)或體外培養(yǎng)生產的單克隆抗體。動物細胞融合除了采用植物細胞原生質體融合常用誘導劑（物理方法和化學方法）外，還可以采用滅活的病毒（生物方法）進行誘導。
（4）制備單克隆抗體時要經(jīng)過兩次篩選，第一次篩選的目的是獲得雜交瘤細胞，第二次篩選的目的是獲得能夠產生特異性抗體的雜交瘤細胞。
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