Question

【題目】人參是一種名貴藥材，具有良好的滋補(bǔ)作用�？诜�α-干擾素在慢性乙肝、丙肝及部分腫瘤的治療中有一定療效。下圖為科研人員制備能合成干擾素的人參愈傷組織細(xì)胞的流程，①～④表示相關(guān)的操作，EcoRⅠ、BamHⅠ為限制酶，它們的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)如表所示。請回答下列問題：

（1）步驟①中，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增干擾素基因時(shí)，設(shè)計(jì)引物序列的主要依據(jù)是_________________�？蒲腥藛T還在兩種引物的一端分別加上了______________和_____________序列，以便于后續(xù)的剪切和連接。

（2）過程②所構(gòu)建的基因表達(dá)載體中未標(biāo)注出的必需結(jié)構(gòu)還有_________________，過程③中需先用_________處理農(nóng)桿菌，以便將基因表達(dá)載體導(dǎo)入細(xì)胞。

（3）過程④中，科研人員提取愈傷組織細(xì)胞的RNA后，先通過________________過程獲得DNA，再進(jìn)行PCR擴(kuò)增，若最終未能檢測出干擾素基因，其可能原因是______________________________________。

（4）治療中發(fā)現(xiàn)，用于口服的α-干擾素在胃中會(huì)受到一定程度的破壞，影響其功效，需要利用__________________________技術(shù)加以改造，以達(dá)到滿意效果。

Answer 1

【答案】

（1）干擾素基因兩端的部分核苷酸序列 GAATTC GGATCC

（2）復(fù)制原點(diǎn) Ca2+

（3）逆轉(zhuǎn)錄 干擾素基因未能導(dǎo)入人參愈傷組織細(xì)胞或?qū)�入人參愈傷組織細(xì)胞的干擾素基因未能轉(zhuǎn)錄（4）蛋白質(zhì)工程

【解析】

（1）設(shè)計(jì)引物序列的主要依據(jù)是干擾素基因兩端的部分核苷酸序列。后期需要用限制酶進(jìn)行切割，所以在兩種引物的一端分別加上了GAATTC和GGATCC序列。

（2）構(gòu)建的基因表達(dá)載體中還需要復(fù)制原點(diǎn)。過程③中需先用Ca2+理農(nóng)桿菌以便將基因表達(dá)載體導(dǎo)入細(xì)胞。

（3）RNA通過逆轉(zhuǎn)錄形成DNA，若最終未能檢測出干擾素基因，其可能原因是干擾素基因未能導(dǎo)入人參愈傷組織細(xì)胞或?qū)�入人參愈傷組織細(xì)胞的干擾素基因未能轉(zhuǎn)錄

（4）對α-干擾素進(jìn)行改造需要利用蛋白質(zhì)工程