Question

【題目】家蠶細胞具有高效表達外源基因的能力。將人干擾素基因導入家蠶細胞并大規(guī)模培養(yǎng)，可提取干擾素用于制藥。

(1)進行轉基因操作前，需用___________酶短時處理幼蠶組織，以便獲得單個細胞。

(2)為使干擾素基因在家蠶細胞中高效表達，需要把來自cDNA文庫的干擾素基因片段正確插入載體質粒的啟動子和___________之間。

(3)采用PCR技術可驗證干擾素基因是否已經導入家蠶細胞。該PCR反應體系的主要成分應該包含：擴增緩沖液（含Mg2+）、水，4種脫氧核糖苷酸、模板DNA、引物 和_________________。

(4)將目的基因導入動物細胞最常用的方法是_______________。此方法的受體細胞多是______________。

(5) 將人干擾素基因導入家蠶細胞并大規(guī)模培養(yǎng)時需要提供氣體環(huán)境：95%空氣＋5%CO2。O2是____________所必需的，CO2的主要作用_______________；培養(yǎng)液應進行無菌處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的________________，以防培養(yǎng)過程中的雜菌污染。此外，應定期更換培養(yǎng)液，防止代謝產物積累對細胞自身造成危害。

Answer 1

【答案】 胰蛋白酶（或膠原蛋白酶） 終止子 TaqDNA聚合酶（耐高溫DNA聚合酶） 顯微注射 受精卵（卵母細胞） 細胞代謝 維持培養(yǎng)液的pH 抗生素

【解析】本題考查基因工程和動物細胞培養(yǎng)等知識，要求考生能理解基因工程的基本操作程序，理解動物細胞培養(yǎng)的條件和技術要點，進行準確答題。

(1)動物細胞培養(yǎng)技術中，常用胰蛋白酶（或膠原蛋白酶）酶動物組織，以便獲得單個細胞。

(2)為使干擾素基因在家蠶細胞中高效表達，需要把來自cDNA文庫的干擾素基因片段正確插入載體質粒的啟動子和終止子之間。

(3)PCR技術的原理是體外DNA復制，PCR反應體系的主要成分應該包含：擴增緩沖液（含Mg2+）、水，4種脫氧核糖苷酸、模板DNA、引物 和TaqDNA聚合酶（耐高溫DNA聚合酶）。

(4)將目的基因導入動物細胞最常用的方法是顯微注射，此方法的受體細胞多是受精卵（或卵母細胞）。

(5)動物細胞大規(guī)模培養(yǎng)時需要提供氣體環(huán)境，即95%空氣＋5%CO2。其中O 2是細胞代謝（有氧呼吸）所必需的，CO2的主要作用維持培養(yǎng)液的pH；培養(yǎng)液應進行無菌處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素，以防培養(yǎng)過程中的雜菌污染。此外，應定期更換培養(yǎng)液，防止代謝產物積累對細胞自身造成危害。