Question

5．苯酚（C₆H₅OH）是廣泛存在于化工行業(yè)廢水中的一種污染物．為了分離和純化高效分解苯酚的細菌，科研人員進行了如圖A所示的實驗（實驗中的LB培養(yǎng)基能使菌種成倍擴增）．請分析回答：

（1）該實驗中錐形瓶、培養(yǎng)皿和接種環(huán)等可放入干熱滅菌箱中滅菌．與步驟②中培養(yǎng)基的成分相比，步驟③培養(yǎng)基成分的最大區(qū)別是以苯酚作為唯一的碳源；步驟④中的培養(yǎng)基成為固體的原因是添加了瓊脂．
（2）若經(jīng)步驟④培養(yǎng)后菌落的分布如圖B，則接種時甲、乙、丙三個區(qū)域劃線的操作順序依次是甲、乙、丙．多次劃線后，最終可得到由1個細胞繁殖而來的單個菌落．
（3）接種時，在第一區(qū)域劃線后須將接種環(huán)灼燒、冷卻后再劃線，在第二次劃線時須從第一次劃線的末端開始，這樣做的目的是（從上一區(qū)域）獲取菌種．
（4）步驟④的目的是分離純化能分解苯酚的菌株；經(jīng)過步驟⑤培養(yǎng)后，應(yīng)從殘余苯酚濃度最低的培養(yǎng)瓶中再分離、培養(yǎng)目的菌株，若需將獲得的菌種長期保存，常采用甘油管藏的方法．

Answer 1

分析 1、滅菌的方法主要有灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌．灼燒滅菌適合于接種工具的滅菌，一般來說是在操作過程中金屬類的接種工具．干熱滅菌適合于玻璃器皿、金屬工具的滅菌．高壓蒸汽滅菌適合于玻璃器皿、接種工具以及培養(yǎng)基．特別注意培養(yǎng)基的滅菌只能用高壓蒸汽滅菌．
2、微生物的營養(yǎng)物質(zhì)有5類，分別是水、無機鹽、碳源、氮源及特殊生長因子．
3、從土壤中分離微生物的一般步驟是：土壤取樣、選擇培養(yǎng)、梯度稀釋、涂布培養(yǎng)和篩選菌株．篩選菌株的過程要使用選擇培養(yǎng)基，操作過程中要注意無菌操作，常用的固體培養(yǎng)基上接種方法主要有平板劃線法和稀釋涂布平板法．微生物計數(shù)可用稀釋涂布平板法和血球計數(shù)板計數(shù)法．

解答 解：（1）干熱滅菌適合于玻璃器皿、金屬工具的滅菌，該實驗中錐形瓶、培養(yǎng)皿和接種環(huán)等可放入干熱滅菌箱中滅菌．為了分離和純化高效分解苯酚的細菌，與步驟②中培養(yǎng)基的成分相比，步驟③培養(yǎng)基成分的最大區(qū)別是以苯酚作為唯一的碳源；步驟④中的培養(yǎng)基成為固體的原因是添加了凝固劑瓊脂．
（2）利用平板劃線法接種時，由圖可知，劃線順序應(yīng)為甲→乙→丙，最終可以得到由一個細胞繁殖而來的單個菌落．
（3）接種時，在第一區(qū)域劃線后須將接種環(huán)灼燒、冷卻后再劃線，在第二次劃線時須從第一次劃線的末端開始，這樣做的目的是（從上一區(qū)域）獲取菌種．
（4）步驟④的目的是分離純化能分解苯酚的菌株；由于該菌株能夠分解苯酚，因此經(jīng)過步驟⑤培養(yǎng)后，應(yīng)從殘余苯酚濃度最低的培養(yǎng)瓶中再分離、培養(yǎng)目的菌株，若需將獲得的菌種長期保存，常采用甘油管藏的方法．
故答案為：
（1）錐形瓶、培養(yǎng)皿和接種環(huán)    碳源   瓊脂
（2）甲、乙、丙     1
（3）灼燒、冷卻    （從上一區(qū)域）獲取菌種
（4）分離純化能分解苯酚的菌株    最低   甘油管藏

點評 本題主要考查微生物的篩選與分離與微生物的計數(shù)等知識，意在加強學(xué)生對相關(guān)知識點的識記與理解．